商品屬性：
貨號
規(guī)格
產品名稱
A-PJ1034-80T(50 μl 體系)
80T(50 μl 體系)
RAPA3G動物組織直擴PCR試劑盒
儲存條件：
RAPA3G動物組織直擴PCR試劑盒長期儲存置于-20°C 以下，可保存 2 年；短期使用置于 4°C（3 個月）保存。
產品介紹：
RAPA3G DNA 聚合酶為經電子重構架的第三代 Taq DNA 聚合酶，第三代 DNA 聚合酶具有高度的雜質耐受性、 長片段擴增能力、高擴增成功率、高產量，這些特點使得 RAPA3G 系列產品可用于粗制樣品的直接擴增，無需核酸純 化步驟。該 PCR Mix 具有 5’-3’的聚合酶活性、5’-3’的外切 酶活性、3’-5’的外切酶活性，產物部分帶有”A“尾巴，部 分為平末端，因此產物可用于 TA 克隆或平端克隆。
特點和用途：
（1）高雜質耐受性：該 PCR Mix 可直接使用血液、蛋白含量較高的動物組織材料進行 PCR 擴增，無需基因組提取。 （2）高效的快速 DNA 釋放劑：盡管該 PCR Mix 可以直接使用組織細胞材料進行擴增，但我們仍然推薦采用 DNA 釋放劑進行樣本的快速前處理（約需要 5min，可高通量操作）。DNA 釋放劑的前處理，使得制備的 DNA 模板可以進行多次、多基因擴增，并長期保存 DNA，經 DNA 釋放劑處理的樣本，在室溫條件下放置 1 個月，無任何后續(xù)影響，-20 可長期保存。 （3）快速 PCR：該酶具有 6kb/min 以上的擴增速度，可顯著的縮短 PCR 的擴增時間，在常規(guī)測試條件下，10s 的延伸時間可完成 1kb 的基因組 DNA 擴增。 （4）粗制樣品的擴增能力：擴增能力>4kb。 （5）高保真性能：該制品包含一定比例的 RAPA HiFi 超保真 DNA 聚合酶，因此其具有一定的保真性能（經藍白斑測試，其保真性能約為 Taq DNA 聚合酶的 56 倍）。 （6）熱啟動，防止非特異性擴增：RAPA3G 系列產品均采用 專有的熱啟動技術，確保 50 度以下完全無活性，僅有 95 度加熱 5min 以后才能恢復其活性，因此可*大限度的提高擴增的特異性，減少非特異性產物的產生。 包裝： 2×RAPA3G PCR Mix (with Dye) 1ml×2 快速 DNA 釋放劑 A 20 ml 快速 DNA 釋放劑 B 20 ml
使用方法：
1. DNA 釋放 （1）采用加熱法：取 2-10 個毛發(fā)囊、1-10mg 動物組織等材料，放入到 0.2ml EP 管中，加入 50 μl 快速 DNA 釋放劑A，于 PCR 儀中 98°C 加熱 5min，加熱完畢后加入 50 μl快速 DNA 釋放劑 B，混合均勻，即可???用。 （2）采用鋼珠研磨法：取 1-10mg 動物組織等材料，放入到 2ml EP 管中，加入 250 μl 快速 DNA 釋放劑 A 和 2-3 粒鋼珠，研磨 1-2min 成漿體裝。研磨完畢后加入 250 μl 快速DNA 釋放劑 B，混合均勻，即可使用。 2. 按下表配制 PCR 反應體系并混合均勻： 2×RAPA3G PCR Mix (with Dye) 25 μl 上游引物(10 μM) 2 μl 下游引物(10 μM) 2 μl 步驟 1 制備的模板 DNA 2 μl ddH2O 19 μl 注意：當擴增片段>5kb 時，引物用量調整為 0.25-0.5μl。 3. PCR 擴增循環(huán)參數(shù) 循環(huán)數(shù) 溫度 時間 預變性 95°C 5min 25-40 Cycles 95°C 20s 50~60°C 20s 72°C 4-6kb/min 末延伸 72°C 2min 請注意：（1）該制品為熱啟動制品預變性步驟 5min 不可縮短，否則 DNA 聚合酶無法恢復活性。（2）當擴增片段<1kb時，延伸時間使用 15s；擴增片段 1-2kb 時,延伸時間使用45s，擴增片段 2-3kb 時,延伸時間使用 1min，當擴增片段>3kb 時，請按照 2kb/min 的延伸時間進行設置。(3)盡管該酶具有 6kb/min 的延伸速度，但按照 2kb/min 設置延伸時間的條件下，能獲得*高的產量。 3. 注意事項：(1) 當模板 GC 含量>70%時，請?zhí)砑?× Q-Solution。(2)當采用全血、血漿等蛋白含量極高的樣本時，擴增完畢后可能會有變性的蛋白沉淀，請離心后再進行點樣和電泳。
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