熒光抗體染色直接法步驟:

1．染色

切片經(jīng)固定后，滴加經(jīng)稀釋至染色效價如1：8或1：16的熒光抗體（如兔抗人γ-球蛋白熒光抗體或兔抗人 IgG或 IgA 熒光抗體等），在室溫或37℃染色30min，切片置入能保持潮濕的染色盒內(nèi)，防止干燥。

2．洗片

傾去存留的熒光抗體，將切片浸入 pH7.4或 pH7.2PBS 中洗兩次，攪拌，每次5min，再用蒸餾水洗1min，除去鹽結(jié)晶。

3．用50%緩沖（0.5mol/L 碳酸鹽緩沖液 pH9.0～9.5）甘油封固、鏡檢

4．對照染色

①正常免熒光血清染色，如上法處理切片，結(jié)果應(yīng)為陰性。

②染色抑制試驗（一步法）：將熒光抗體和未標(biāo)記的抗體球蛋白或血清（相同）等量混合，如上法處理切片。結(jié)果應(yīng)為陰性。

為證明此種染色抑制不是由于熒光抗體被稀釋所致，可用鹽水代替未標(biāo)記抗血清，染色結(jié)果應(yīng)為陽性。此法結(jié)果較二步法穩(wěn)定。

③類屬抗原染色試驗，前面已作敘述。

直接法比較簡單，適合做xi 菌、螺旋體、原蟲、真jun 及濃度較高的蛋白質(zhì)抗原如腎、皮膚的檢查和研究。

此法每種熒光抗體只能檢查一種相應(yīng)的抗原，特異性高而敏感性較低。