產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復孔間差異小,實驗結果重復性強
擴增性能優(yōu):擴增效率高,熒光信號強
產(chǎn)品名稱
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MTHFR和MTRR基因試劑盒PCR熔解曲線法
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規(guī)格
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50T
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貨號
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XG-R63809
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儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)**的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl)
1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
873001-54-83,29-二苯甲酰基栝樓仁三醇廠家 3,29-Dibenzoyl Rarounitriol 組織艾滋病毒1蛋白酶(HIV-1PROTEASE)活性熒光淬滅法定量檢測試劑盒20
87205-99-0二氫丹參酮Ⅰ說明書 Dihydrotanshinone I 組織艾滋病毒1蛋白酶(HIV-1PROTEASE)活性比色法定量檢測試劑盒20
86639-52-37-乙基-10羥基喜樹堿說明書 7-Ethyl-10-hydroxycamptothecin 組織β-內(nèi)酰胺酶報告基因活性熒光定量檢測試劑盒20
866366-86-1噻嗪二酮苷規(guī)格 Xanthiside 組織β氨基己糖苷酶(β-hexosaminidase)活性比色法定量檢測試劑盒20
86632-03-33,4,5-三咖啡??鼘幩崞放?span> 3,4,5-Tricaffeoylquinic acid
組織α-L-巖藻糖苷酶(AFU)比色法定量檢測試劑盒20
山羊主要組織相容性復合體(MHC/OLA)ELISA檢測試劑盒Goatmajorhistocompatibilitycomplex,MHC/OLAELISAKit
96T/48T 70553-76-3蝙蝠葛蘇林堿廠家 Daurisoline
犬血栓前體蛋白(TpP)試劑盒 Canine thrombus precursor
protein,TpP ELISA Kit 524-17-4蝙蝠葛堿說明書 Dauricine
英文名稱Mouse14-3-3proteinELISAKit小鼠14-3-3蛋白(14-3-3pro)規(guī)格:96T/48T 1258-84-0扁塑藤素品牌 Pristimerin
腸集聚型大腸埃希菌(EeroaggregativeE.coli)鑒定16SrDNAPCR擴增檢測試劑盒20 572-30-5扁蓄苷規(guī)格 Avicularin
RatGamma-aminobyricacid,GABAELISA試劑盒大鼠γ氨基(GABA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 524-17-4蝙蝠葛堿廠家 Dauricine
RatFibrinogenDegradationProduct,FDPELISA試劑盒大鼠血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 201-482-7豆甾醇廠家 Stigmasterol
小鼠組織金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP1)ELISA試劑盒 ,英文名: TIMP1 ELISA Kit 303-45-7棉酚說明書 Gossypol
綿羊白介素2受體(IL-2R)ELISA檢測試劑盒SheepIerleukin-2receptor,IL-2RELISAkit
96T/48T 12542-36-8醋酸棉酚品牌 Gossypol acetic acid
犬胰高血糖素樣肽1(GLP1)試劑盒 Dog glucagon like peptide
1,GLP1 ELISA Kit 6812-81-3櫟癭酸規(guī)格 Roburic acid
英文名稱MouseAdenosineiphosphataseELISAKit小鼠ATP酶規(guī)格:96T/48T 81907-62-2靈芝酸A廠家 Ganoderic acid A
162857-65-0瓜子金皂苷V廠家 Polygalasaponin V 英文名稱RatHRAbIgMELISAKit大鼠抗心肌抗體IgM(HRAbIgM)規(guī)格:96T/48T
1617-53-4穗花杉雙黃酮品牌 Amentoflavone 英文名稱RatHRAbIgGELISAKit大鼠抗心肌抗體IgG(HRAbIgG)規(guī)格:96T/48T
1617-53-4穗花杉雙黃酮規(guī)格 Amentoflavone 英文名稱RatHRAbIgGELISAKit大鼠抗心肌抗體IgG(HRAbIgG)規(guī)格:96T/48T
161207-05-2升麻酮醇-3-O-α-L-拉伯糖苷規(guī)格 Cimigenol-3-O-β-D-xylpyranoside 英文名稱RatHLA-2ELISAKit大鼠組織相容性抗原(HLA-2)規(guī)格:96T/48T
15-羥基松香酸說明書
15-hydroxy-abietic-acid 英文名稱RatHLA-2ELISAKit大鼠組織相容性抗原(HLA-2)規(guī)格:96T/48T
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
MTHFR和MTRR基因試劑盒PCR熔解曲線法在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。