PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

產(chǎn)品特點(diǎn): 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測(cè)個(gè)位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復(fù)孔間差異小，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu)：擴(kuò)增效率高，熒光信號(hào)強(qiáng)

儲(chǔ)存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)**的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

黃芪總皂苷規(guī)格  Astragaloside   組織尿酸含量直接(TPTZ)比色法定量檢測(cè)試劑盒50

換規(guī)格換規(guī)格品牌  換規(guī)格   組織尿酸含量酶偶聯(lián)比色法定量檢測(cè)試劑盒20

槐角堿說(shuō)明書(shū)    組織尿素比色法定量檢測(cè)試劑盒20

槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龍膽雙糖苷廠家  Quercetin-3-O-b-D-glucose-7-O-b-D-gentiobiosiden   組織尿激酶型纖維蛋白溶酶原激活劑(uPA)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20

廣藿香酮規(guī)格  Pogostone   組織尿激酶型纖維蛋白溶酶原激活劑(uPA)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20
小鼠組織金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP2)ELISA試劑盒 ，英文名： TIMP2 ELISA Kit  36052-37-6山姜素規(guī)格  Alpinetin

鴨主要組織相容性復(fù)合體(MHC)ELISA檢測(cè)試劑盒Duckmajorhistocompatibilitycomplex,MHCELISAKit 96T/48T  19309-14-9小豆蔻明廠家  Cardamonin

犬胰腺甘油三酯脂酶(PNLIP)試劑盒 Dog Pancreatic iacylglycerol lipase,PNLIP ELISA kit  24502-78-1乙酰紫草素說(shuō)明書(shū)  Acetylshikonin 

英文名稱MouseAβ1-40proteinELISAKit小鼠Aβ1-40蛋白規(guī)格：96T/48T  34157-83-0雷公藤紅素品牌  Celastrol

同酸待測(cè)樣品處理試劑盒20  69659-80-9丹參酮IIA-磺酸鈉規(guī)格  Sulfotanshinone  Injection
MousesecretoryimmunoglobulinA,sIgAELISAKit小鼠分泌型球蛋白A(sIgA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  芹菜素-7-O-槐糖苷規(guī)格  Apigenin-7-O-β-D-sophoroside 

小鼠左右決定因子2(LEFTY2)ELISA試劑盒 ，英文名： LEFTY2 ELISA Kit  7014-39-3新異甘草苷廠家  Neoisoliquiritin

鴨白介素2(IL-2)ELISA檢測(cè)試劑盒DuckIerleukin2,IL-2ELISAkit 96T/48T  23696-85-7突厥烯酮品牌  Damascenone 

犬誘導(dǎo)型合成酶(iNOS)試劑盒 Dog inducible niic oxide syhase,iNOS ELISA Kit  5471-51-2覆盆子酮規(guī)格  4-(4-hydroxyphenyl)-2-butanone 

英文名稱MouseCXCL12ELISAKit小鼠B-細(xì)胞趨化因子12(CXCL12)規(guī)格：96T/48T  602-41-5硫秋水仙苷廠家  Thiocolchicoside
豬沙門(mén)氏菌抗體elisa試劑盒   豬沙門(mén)氏菌抗體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬沙門(mén)氏菌抗體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬沙門(mén)氏菌抗體試劑盒、豬沙門(mén)氏菌抗體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Rubanthrone A  441764-20-1  中文名：  分子式：C17H14O10  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

豬肉毒堿脂酰轉(zhuǎn)移酶（CACT）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Solvent Yellow 3  中文名：溶劑黃  分子式：C14H15N3  度：99.0%

豬熱休克蛋白90elisa試劑盒   豬熱休克蛋白90試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬熱休克蛋白90試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬熱休克蛋白90試劑盒、豬熱休克蛋白90eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。     Rubanthrone A  441764-20-1  中文名：  分子式：C17H14O10 

豬熱休克蛋白90(HSP-90)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Solvent Yellow 3  中文名：溶劑黃  分子式：C14H15N3 

豬熱休克蛋白90(HSP-90)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Senkyunolide I  94596-28-8  中文名：  分子式：C12H16O4
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
經(jīng)典豬瘟病毒(CSFV)RNA試劑盒恒溫?zé)晒夥?/span>三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個(gè)專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾高壓。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。

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