產(chǎn)品特點(diǎn): 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測(cè)個(gè)位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復(fù)孔間差異小，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu)：擴(kuò)增效率高，熒光信號(hào)強(qiáng)

儲(chǔ)存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)**的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個(gè)專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾高壓。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
SW1116(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小腸隱窩上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)番瀉苷D（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Sennoside D

小鼠肺腺癌細(xì)胞系;LA795二氫辣椒堿（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Dihydrocapsaicin

人羊膜上皮細(xì)胞(HAEpic)( 5×105 )五味子酯乙（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Schizandrol B

CM-R120大鼠角膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL柴胡皂苷B1（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品SaikosaponinB1

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;3T3-L1 小鼠成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL番茄堿（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Tomatidine
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);DUKXB11 carrying pDEF202-hTPO-P1 骨髓瘤細(xì)胞，P3X63Ag8.653細(xì)胞 RN-c細(xì)胞，大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞殺螟丹(標(biāo)準(zhǔn)品)Aramite質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;HUV-EC殺螟丹標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=3%)Aramite solution質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=3%

LIFR Others Mouse 小鼠 LIFR / CD118 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) Amberlite?IRA402 強(qiáng)堿型陰離子交換樹脂(氯型)Amberlite? IRA402質(zhì)量規(guī)格：氯型

腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)Amberlite XAD-1180N 非離子型多孔樹脂(粒徑0.350 - 0.600 mm)Amberlite® XAD1180N質(zhì)量規(guī)格：粒徑0.350 - 0.600 mm

CTLA4 Others Cynomolgus 食蟹猴 CTLA4 / CD152 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 嘧菌酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Azoxystrobin質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品
CD86 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD86 / B7-2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 二十七烷shēng huà shì jì容量：保存：-20℃500毫克

兔晶體上皮細(xì)胞永生系;N/N1003A(RLE)無(wú)水錄化(II) CHROMIUM(II) CHLORIDq 10049-02-2

QG-56細(xì)胞，人肺扁平上皮癌細(xì)胞 中國(guó)倉(cāng)鼠倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞亞株,CHO-K1細(xì)胞 CM-M010小鼠肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL聚乙二醇 12000 Poly(ethylene glycol) 12,000 (PEG 12000) 25322-68-3 500G 通用試劑

Saos-2(人骨肉瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2赤霉素GA4+7shēng huà shì jì容量：RT5克

Gibco 12558-011 TM-C100 Complete Medium,(system) 1 setDicamba 1g/5g Sigma 523844
中文名稱   方法   規(guī)格  Alogliptin  中文名：阿格列汀  分子式：C18H21N5O2  度：98.0%

中文名稱   方法   規(guī)格  3-(5-(2-Aminopropyl)-7-cyanoindolin-1-yl)propyl benzoate (2R,3R)-2,3-dihydroxysuccinate  中文名：  分子式：C26H31N3O8  度：98.0%

中文名稱   方法   規(guī)格  2-Benzyl-2-(dimethylamino)-4'-morpholinobutyrophenone  119313-12-1  中文名：2-芐基-2-(二甲基氨基)-4'-嗎啉基苯基丁酮  分子式：C23H30N2O2 

中文名稱   方法   規(guī)格              Naftifine   65473-14-5  中文名：鹽酸萘替芬  分子式：C21H22ClN 

中文名稱   方法   規(guī)格              N,N'-Bis(2-hydroxyethyl)oxamide  1871-89-2  中文名：N,N'-雙(2-羥乙基)草酰胺  分子式：C6H12N2O4
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
枯草芽孢桿菌試劑盒恒溫?zé)晒夥?/span>1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。