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操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
我司主營產(chǎn)品之一,產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進行生產(chǎn),并經(jīng)過了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測,我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量,從而保證您的實驗順利進行。產(chǎn)品供貨周期短,供貨及時,且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。
產(chǎn)品名稱 |
人Ⅱ型膠原(COL2)免費代測ELISA Kit |
英文名稱 |
Human Collagen Type II(COL2)ELISA Kit |
貨號 |
PH103584 |
試劑配制:
1、酶聯(lián)板assay plate :一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard:2瓶凍干品。
3、樣品稀釋液sample diluent:1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent:1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent:1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody:1×120μl/瓶1:100
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin:1×120μl/瓶1:100
8、底物溶液tmb e:1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer:1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution:1×10ml/瓶2n h2so4。
試劑準(zhǔn)備:
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC),試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管,每個EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度, 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液:用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL,進行30倍稀釋。
樣本實驗前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
注意事項:
1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱,已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品,請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復(fù) 30 min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測,且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染,請在試驗中使用 1 次性試管,槍頭,封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上,使用前請離心處理(5-10 S 即可),使管壁上的液體集中在管底部,取用時,請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確,每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
盾葉新苷 Zingiberensis saponin I 5mg
三角葉薯蕷皂苷 Deltonin 5mg
槐黃醇 Sophoflavescenol 5mg
法篳枝苷 Fabiatrin 5mg
苦參醇I Kushenol I 5mg
升麻素-4'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 Cimifugin 4'-O-β-D-glucopyranoside 5mg
寶藿苷II Baohuoside II 10mg
2''-O-鼠李糖基羊藿次苷II Icariside II 5mg
寶藿苷VII Baohuoside VII 5mg
衛(wèi)矛堿 Euonymine 5mg
萊苞迪苷G 97% Rebaudioside G 5mgPSP抗體
外周蛋白抗體
前列腺特異性抗原單克隆抗體(包被)
鼠抗前列腺特異性抗原單克隆抗體(檢測)
血小板活化因子受體抗體
干擾素誘導(dǎo)蛋白p58ipk抗體
重組蛋白G抗體
磷脂酰肌醇激酶催化亞單位A抗體
抑制素/腫瘤抑制因子抗體
脂蛋脂酶A2抗體
胰脂肪酶抗體
重組金黃色葡萄球蛋白A抗體
磷酸脂磷酸水解酶2抗體
人Ⅱ型膠原(COL2)免費代測ELISA KitC21ORF62 21號染色體開放閱讀框62抗體 0.2ml
沉默調(diào)節(jié)蛋白1(SIRT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISA Kit for Sirtuin 1 (SIRT1) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)
C1QL1 補體組分1q子成分樣蛋白1抗體 0.2ml
鈣離子轉(zhuǎn)運ATP酶A2(ATP2A2)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISA Kit for ATPase, Ca++ Transporting, Cardiac Muscle, Slow Twitch 2 (ATP2A2) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)
PCDHGA1 原鈣粘蛋白γA1抗體 0.2ml
鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶Ⅱα(CAMK2α)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISA Kit for Calcium/Calmodulin Dependent Protein Kinase II Alpha (CAMK2a) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)
Phospho-AP2M1 (Thr156) 磷酸化接頭相關(guān)蛋白復(fù)合體AP-2μ鏈1抗體 0.1ml
雌受體相關(guān)受體α(ERRα)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISA Kit for Estrogen Related Receptor Alpha (ERRa) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)
Bad 相關(guān)死亡促進因子Bad抗體 0.1ml
Nexn結(jié)合蛋白(NEXN)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISA Kit for Nexilin (NEXN) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)
Pancreatic Lipase 胰脂肪酶抗體 0.1ml
T-細(xì)胞調(diào)節(jié)因子1(TCIRG1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISA Kit for T-Cell, Immune Regulator 1 (TCIRG1) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)