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第2年
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PCR反應(yīng)沒有目的片段考慮方面 PCR反應(yīng)沒有目的片段考慮方面:1.含有PCR反應(yīng)抑制物對樣本稀釋(l:100和1:1000)后再擴增，并通過在已知陽性模板中加入原始PCR混合物進行擴增，驗證抑制物的存在；2.模板濃度太低，擴增循環(huán)數(shù)不夠盡可能降低退火溫度，在降落PCR的低溫度增加10個擴增循環(huán)；3.非特異擴增增加起始模板的變性溫度(通常為95℃5min)，采用降落PCR和熱啟動PCR4.擴增反應(yīng)混合液中各成分濃度不對改變Taq發(fā)布時間：2024-12-24 16:54 點擊次數(shù)：5 次
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反向 PCR的特點 常規(guī)PCR是擴增兩引物之間的DNA片段,反向PCR(reversePCR)是用引物來擴增兩引物以外的DNA片段。一般先用限制性內(nèi)切酶酶解DNA(目的基因中不存在該酶的酶切位點,且片段應(yīng)短于2～3kb),然后用連接酶使帶有黏性末端的靶片段自身環(huán)化,后用一對反向引物進行PCR,得到的線性DNA將含有兩引物外側(cè)的未知序列。該技術(shù)可對未知序列擴增后進行分析,如探索鄰接已知DNA片段的序列。反向PCR已成功發(fā)布時間：2024-12-17 16:59 點擊次數(shù)：16 次
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細胞培養(yǎng)一般過程 細胞培養(yǎng)一般過程：1、細胞傳代（貼壁細胞）：試劑：PBS,胰酶，含血清的培養(yǎng)基；流程：顯微鏡下看一看培養(yǎng)皿里的細胞多不多，太多（80%~90%）會導(dǎo)致代謝廢物很多，先吸掉廢液，再用PBS洗一洗，同時太多會導(dǎo)致細胞黏在一起，這時候就需要加點胰酶消除它們之間的粘性，是否消除完，在顯微鏡下看一看，看完加入適宜的含血清的培養(yǎng)基，中和一下胰酶，這叫吹打，除此之外，細胞太多了，把一部分細胞移出來，加入適量的培發(fā)布時間：2024-12-10 11:51 點擊次數(shù)：26 次
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ELISA試劑盒檢測目的抗原辨別方法 利用干擾實驗即可辨別ELISA試劑盒是否檢測目的抗原，方法如下：1、將針對試劑盒特異性的重組蛋白抗原和試劑盒中的檢測抗體配置成antibody:antigen≈1:2的混合孵育液。2、37℃孵育15分鐘后，代替原試劑盒中的檢測抗體3、后續(xù)操作按照試劑盒說明書進行，加檢測抗體、酶復(fù)合物和底物4、實驗完畢后，檢測其標準曲線，如果標準曲線良好則說明加入的目的抗原和試劑盒抗體不匹配，試劑盒檢測抗體針對的是發(fā)布時間：2024-12-02 10:46 點擊次數(shù)：32 次
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ELISA檢測試劑盒試驗常見標本處理 ELISA檢測試劑盒試驗常見標本處理：1.血清：室溫血液私人凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。2.血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細收集上清，如有沉淀形成，應(yīng)再次離心3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000發(fā)布時間：2024-11-25 10:37 點擊次數(shù)：41 次
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PCR反應(yīng)的主要物質(zhì)解說 參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+詳細解說：1.引物引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。2.酶及其濃度目前有兩種TaqDNA聚合酶，一種是從棲熱水生桿菌中提純的天然酶，另一種為大腸菌合成的基因工程酶。催化發(fā)布時間：2024-11-18 10:37 點擊次數(shù)：62 次
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大鼠ELISA檢測試劑盒試驗血清解凍過程 大鼠ELISA檢測試劑盒試驗血清解凍過程：1、請勿將血清置于37℃太久，若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。2、按照所建議的逐步解凍法(-2O℃至4℃至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。3、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。4、隨時將之搖晃均勻，使溫度發(fā)布時間：2024-11-11 16:08 點擊次數(shù)：61 次
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選擇DNA提取試劑盒考慮因素 選擇合適的DNA提取試劑盒是進行分子生物學(xué)實驗的關(guān)鍵步驟。以下是選擇DNA提取試劑盒時需要考慮的幾個因素：1、樣本類型：不同的樣本類型（如血液、組織、植物、**、土壤等）可能需要不同的提取方法。確保選擇的試劑盒適用于你的樣本類型。2、DNA純度要求：根據(jù)后續(xù)實驗的需求，你可能需要高純度的DNA。一些試劑盒專門設(shè)計用于去除PCR抑制劑，這對于后續(xù)的分子生物學(xué)實驗（如PCR、qPCR）尤為重要。3、D發(fā)布時間：2024-11-04 15:23 點擊次數(shù)：63 次
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PCR反應(yīng)內(nèi)參基因的三大作用 PCR反應(yīng)內(nèi)參基因的三大作用：1.樣品提取質(zhì)量的判斷標準在PCR實驗中，內(nèi)參基因首先作為判斷樣品提取是否成功的標準。當使用逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA進行PCR實驗時，如果結(jié)果為陰性，不能直接得出樣品中沒有目的基因的結(jié)論。只有當內(nèi)參基因的CT值處于一個合理的范圍內(nèi)，例如20左右，我們才能確信樣品制備沒有問題，從而確保實驗結(jié)果的可靠性。2.目的基因表達量的計算基礎(chǔ)在進行相對定量PCR時，內(nèi)參基因是計算目的基發(fā)布時間：2024-10-29 11:04 點擊次數(shù)：209 次
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普通pcr引物設(shè)計和熒光定量pcr引物設(shè)計差異 普通pcr引物設(shè)計和熒光定量pcr引物設(shè)計的區(qū)別一、方法不同1、普通pcr引物設(shè)計：引物的優(yōu)劣直接關(guān)系到PCR的特異性與成功與否。2、熒光定量pcr引物設(shè)計：通過熒光染料或熒光標記的特異性探針，標記跟蹤PCR產(chǎn)物進行實時監(jiān)測反應(yīng)，利用與之相適應(yīng)的軟件對產(chǎn)物進行分析，計算待測樣品模板的初始濃度二、原理不同1、普通pcr引物設(shè)計：為了找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地擴增模板DNA序列。2、熒光定發(fā)布時間：2024-10-25 13:53 點擊次數(shù)：232 次
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ELISA實驗操控的儀器操作技能 為了使終究的ELISA試劑盒實驗效果就要較高的可靠性，應(yīng)在實驗開端前有必要好的前期準備作業(yè)包括對實驗所需的儀器進行質(zhì)控。使儀器堅持作業(yè)狀況，應(yīng)建立維護和校對儀器的標準操作程序，常見需求操控的儀器包括：移液器（加樣槍）、溫箱、洗板機和酶標儀。具體質(zhì)控操作技能整理的如下要求： 1、洗板機：每個設(shè)置洗板后的殘留液有各自的規(guī)矩，一般不逾越2μl；人工扣板時，墊紙不濕；守時檢查管孔是否阻塞。2、酶標儀：常常發(fā)布時間：2024-10-21 10:58 點擊次數(shù)：77 次
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ELISA實驗各項條件的選擇 在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:1、固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。2、包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相發(fā)布時間：2024-10-14 16:43 點擊次數(shù)：94 次
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抗體驗證的八種方法介紹 抗體驗證的八種方法：1.省略一抗這是測試由二級試劑引起的潛在背景的有用且重要的控制。然而，這個實驗沒有提供關(guān)于一抗質(zhì)量的信息。2.抗體信號與文獻數(shù)據(jù)一致WB中觀察到的分子量、組織分布和染色模式與文獻一致。這種驗證方法很容易執(zhí)行，但也有一些限制；例如，WB中條帶的正確分子量并不一定會告訴您該條帶是所需的目標蛋白質(zhì)。在WB中很容易有數(shù)百種蛋白發(fā)布時間：2024-10-09 13:55 點擊次數(shù)：122 次
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ELISA試劑盒檢測未知抗原的雙抗體夾心法過程 這種形式需要使用特定于該抗原不同表位的兩種不同抗體。這兩種抗體通常被稱為匹配抗體對。其中一種抗體包被于多孔板表面上并用作捕獲抗體以促進抗原的固定，另一種抗體被酶偶聯(lián)并促進抗原的檢測。ELISA試劑盒檢測未知抗原的雙抗體夾心法過程：1、包被：用包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/mL。向每個Elisa板孔中加入0.1mL，4℃過夜孵育。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3發(fā)布時間：2024-10-05 13:43 點擊次數(shù)：120 次
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PCR反應(yīng)擴增產(chǎn)物出現(xiàn)多條帶分析 擴增產(chǎn)物出現(xiàn)多條帶（1）引物用量偏大，引物的特異性不高。應(yīng)調(diào)換引物或降低引物的使用量。（2）循環(huán)的次數(shù)過多。適當增加模板的量，減少循環(huán)次數(shù)。（3）酶的用量偏高或酶的質(zhì)量不好，應(yīng)降低酶量或調(diào)換另一來源的酶。（4）退火溫度偏低，退火及延伸時間偏長。應(yīng)提高退火溫度，減少變性與延伸時間，也可采用二種溫度的PCR擴增。（5）樣品處理不當。（6）Mg2+濃度偏高，因適當調(diào)整Mg2+使用濃度。（7）若為PCR試發(fā)布時間：2024-09-27 14:19 點擊次數(shù)：165 次