- 入駐時(shí)間: 2021-06-18
- 聯(lián)系人:韓麗君
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細(xì)胞接收后的處理:
1)收到細(xì)胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號
BHK-21(C-13):BHK21C13
1×106
P-X1151
產(chǎn)品詳情:
細(xì)胞別稱:BHK 21; BHK21; Baby Hamster Kidney-21; Baby Hamster Kidney 21; Baby Hamster Kidney from litter No. 21; BHK;倉鼠腎成纖維細(xì)胞
種屬來源:倉鼠
年齡性別:1日齡
組織來源:正常腎
生長特性:貼壁生長
細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞
背景簡介:BHK-21細(xì)胞系(Baby hamster kidney cell line)是從敘利亞幼鼠腎組織中分離培養(yǎng)獲得的成纖維型貼壁細(xì)胞系,其可連續(xù)傳代。BHK-21細(xì)胞系可以用于多種病毒的增殖和純化,如口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)、腦心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)、呼腸孤病毒(Reovirus)、水皰性口炎病毒(Vesicularstomatitis virus,VSV)等。目前,BHK-21細(xì)胞系已被廣泛應(yīng)用于口蹄疫疫苗的生產(chǎn)。
生物等級:1
細(xì)胞規(guī)格:1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測:無
基因表達(dá)情況:
保藏機(jī)構(gòu):ATCC; CRL-6282
培養(yǎng)基:
培養(yǎng)條件:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
凍存條件:無血清凍存液,液氮儲存
倍增時(shí)間:~12 hours
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二.細(xì)胞處理:
1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇::將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:1、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例:
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理:
公司正在出售的產(chǎn)品:
白細(xì)胞介素34抗體 |
突觸結(jié)合蛋白11抗體 Synaptotagmin XI |
IL34 |
8-羥基鳥嘌呤DNA糖基化酶 OGG1 |
粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體 |
SH3結(jié)構(gòu)域激酶結(jié)合蛋白1抗體 SH3KBP1 |
AMIGO3 |
RTDR1蛋白抗體 RTDR1 |
AF647標(biāo)記的程序性死亡配體1(CD274)抗體 PD-L1, Alexa Fluor 647 conjugated |
微管蛋白折疊輔助因子E樣抗體 TBCEL |
鉀離子通道多聚體結(jié)構(gòu)域蛋白10抗體 KCTD10 |
尤文肉瘤FLI1蛋白抗體 FLI1 |
角蛋白相關(guān)蛋白KAP8.1抗體 KAP8.1 |
二氫葉酸還原酶抗體 DHFR |
乙?;M蛋白H2B (Lys120)鼠單克隆抗體 Histone H2B (Acetyl K120) |
防御素α5抗體 Defensin alpha 5 |
大鼠白介素13(IL13)elisa檢測試劑盒 |
GRHL1蛋白抗體 GRHL1 |
小鼠花生四烯酸(AA)elisa分析檢測試劑盒 |
G蛋白偶聯(lián)受體1抗體 GPR1 |
昆蟲組蛋白提取試劑盒100T |
囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SEC22C抗體 SEC22C |
石蠟切片彈性纖維(ELASTIC)馬森(MASSON)染色試劑盒 |
尿激酶型纖溶酶原激活因子抗體 Urokinase |
脂多糖(LPS)提取試劑盒100T |
HPV6(HUMAN PAPILLOMAVIRUS-6)病毒標(biāo)準(zhǔn)曲線定量PCR |
大鼠絨毛膜促性腺(CG)elisa檢測試劑盒 |
BHK-21(C-13)倉鼠腎成纖維細(xì)胞豚鼠白介素5(IL-5)elisa檢測試劑盒 |
人白介素5(IL-5)elisa檢測試劑盒免費(fèi)代測 |
小鼠趨化因子C-X-C-基元受體3(CXCR3)elisa檢測試劑盒 |
細(xì)胞CDK2/CYCLIN A激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C) |
大鼠核因子κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)elisa檢測試劑盒 |
實(shí)驗(yàn)步驟:
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上,利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝,獲得含目的基因的慢病毒;
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板,轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右;
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞,并置于37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中孵育;
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基,并繼續(xù)培養(yǎng);
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng),直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%,獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。