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PCR反應(yīng)出現(xiàn)假陽性解析

假陽性是指出現(xiàn)的 PCR 擴(kuò)增條帶與目的靶序列條帶一致,有時其條帶更整齊,亮度更高。

產(chǎn)生的原因有:

①引物設(shè)計不合適:選擇的擴(kuò)增序列與非目的擴(kuò)增序列有同源性,因而在進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增時,擴(kuò)增出的 PCR 產(chǎn)物為非目的序列;

②靶序列太短或引物太短;

③靶序列或擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染。

解決方法有:操作輕柔,防止靶序列吸入加樣槍內(nèi)或濺出離心管外造成污染;除酶及不能耐高溫的物質(zhì)外,所有試劑或器材高壓消 毒;離心管及加樣槍頭等一次性使用。必要時,可在加標(biāo)本前,將反應(yīng)管和試劑用紫外光照射,以破壞存在的核酸。