儲存條件： 僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)**的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產(chǎn)品名稱
人黏附分子E-cad基因熒光PCR檢測試劑盒
規(guī)格
50T
貨號
XG-R64452
產(chǎn)品特點(diǎn): 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷 靈敏度高：可檢測個位拷貝數(shù)的基因 特異性高：有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn) 穩(wěn)定性高：復(fù)孔間差異小，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性強(qiáng) 擴(kuò)增性能優(yōu)：擴(kuò)增效率高，熒光信號強(qiáng)
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟： 方法 1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix （2mM） 4 μl 引物1（10pM） 2 μl 引物2（10pM） 2 μl Taq酶 （2U/μl） 1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 實(shí)驗(yàn)過程： 一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物） 3．10×PCR Buffer 4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5．Taq酶 二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。 三、注意事項 １．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。 ２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。 ３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 ４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。 ５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。 ６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。 ７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
檢測步驟： 一、 試劑的準(zhǔn)備 從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。 設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表： 試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量 熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL 酶混合物 1 μL N×1 μL 總量 15 μL N×15μL （1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。 7.2 qPCR反應(yīng)條件 將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。 推薦循環(huán)條件: 1循環(huán) 50℃ for 2 min 預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec 在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
NGB 小鼠腦紅蛋白ELISA檢測試劑盒 NGB ELISA Kit GR 小鼠糖皮質(zhì)類固醇受體ELISA檢測試劑盒 GR ELISA Kit ON 小鼠骨粘連蛋白ELISA檢測試劑盒 ON ELISA Kit FFA 小鼠游離脂肪酸ELISA檢測試劑盒 FFA ELISA Kit ASMA 小鼠抗平滑肌抗體ELISA檢測試劑盒 ASMA ELISA Kit AMA 小鼠抗單核細(xì)胞抗體ELISA檢測試劑盒 AMA ELISA Kit Kim-1 小鼠腎損傷分子1ELISA檢測試劑盒 Kim-1 ELISA Kit ICA 小鼠胰島細(xì)胞抗體ELISA檢測試劑盒 ICA ELISA Kit GSK 小鼠糖原合成酶激酶ELISA檢測試劑盒 GSK ELISA Kit HK 小鼠己糖激酶ELISA檢測試劑盒 HK ELISA Kit 250g 糊精 Dextrin 室溫干燥避光保存 50T 大豆RR/SS PCR檢測試劑盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 250mL 考馬斯亮藍(lán)染液 Coomassie Blue G-250 Stain Solution 常溫保存 人黏附分子E-cad基因熒光PCR檢測試劑盒2 ug pBC-Hygro pBC-Hygro 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 1mg 天然蛋白A Native Protein A -20℃保存 2 ug pAAV-hrGFP pAAV-hrGFP 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 GVPC瓊脂平板 GVPC Agar Plate 10個/包 1瓶 A172細(xì)胞株 A172 低溫運(yùn)輸和保存 1個 15mLDNA超濾離心管(9-15KD) 100次 總肽檢測試劑盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存 125ML MES Lysis Buffer with Triton,2X MES Lysis Buffer with Triton,2X 常溫保存