公司產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)、不得臨床。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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貨號(hào)
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Mg-ATP溶液100ml
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100ml
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XG-RY2499
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產(chǎn)品名稱:Mg-ATP溶液
規(guī)格:100ml
貨號(hào):XG-RY2499
儲(chǔ)存條件:—20℃,12個(gè)月
用途:凝膠中激酶的分析
注意事項(xiàng):主要由10mM鎂離子、10mM ATP組成。
標(biāo)準(zhǔn)溶液配制:
1。先將PH7.00同PH4.00藥粉分別倒入250毫升蒸餾水中,充分溶解,用兩支玻璃瓶密封保存,做 好標(biāo)簽。
2 。在校正前,準(zhǔn)備ORP標(biāo)準(zhǔn)溶液。
3 。86毫伏:取50至100毫升PH7.00標(biāo)準(zhǔn)溶液置入一玻璃杯中,再加入稍許醌氫醌,充分?jǐn)嚢琛?/span>
4 。256毫伏:取50至100毫升PH4.00標(biāo)準(zhǔn)溶液置入一玻璃杯中,再加入稍許醌氫醌,充分?jǐn)嚢琛?5。 ORP標(biāo)準(zhǔn)液保存期為72hour。
標(biāo)準(zhǔn)品五大類:
1、化學(xué)成分類:標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),純的化合物或是有代表性的基體樣品,天然的或添加(被)分析物的(如,用作農(nóng)藥殘留分析的添加了殺蟲劑的動(dòng)物脂肪),以一種或多種化學(xué)或物理化學(xué)特性值表征。
2、生物和臨床特性類:與目錄A相似的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),但以一種或多種生化或臨床特性值表征,如酶活性。
3、物理特性類:以一種或多種物理特性值表征的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),如熔點(diǎn)、粘性和密度。
4、工程特性類:以一種或多種工程特性值表征的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),如硬度、拉伸強(qiáng)度和表面特性。
5、其他特性。這些類別又被細(xì)分為三級(jí)子類,例如,在化學(xué)成分類中,以微量錳、硅、銅、鎳和鉻含量表征的鋁合金,列于化學(xué)成分一金屬一有色金屬一鋁合金的子類中;在化學(xué)成分類別中,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)還可進(jìn)一步被分為單一成分的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)兩大類;單一成分的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是純物質(zhì)(元素或化合物),或純度、濃度、熔點(diǎn)、熔化焓值、粘度、紫外可見(jiàn)光吸光率、閃點(diǎn)等參考值已確定的純物質(zhì)的溶液;這類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的重要用途之一是分析儀器的檢定或校準(zhǔn)。
溶液的配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
熱休克蛋白40(HSP-40)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒 多主葡萄殼SF2/ASF (D6S7V) Rabbit mAb
熱休克蛋白60(HSP-60/HSPD1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒 銅綠假單胞SimpleChIP® Human HoxA9 Promoter Primers
熱休克蛋白70(HSP-70)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒 孟氏假單胞BRD7 (D9K2T) Rabbit mAb (ChIP Formulated)
熱休克蛋白90(HSP-90)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒 青霉SimpleChIP® Human CTGF Promoter Primers
熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒 劉志恒氏SimpleChIP® Human CTGF Upstream Primers
熱休克轉(zhuǎn)錄因子2(HSF2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒 嗜熱鏈球His-Tag (D3I1O) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)
熱休克轉(zhuǎn)錄因子1(HSF1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒 地衣芽孢桿His-Tag (D3I1O) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)
特異性β1糖蛋白(PSG1/SP1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒淤泥金黃桿Acetyl-Histone H3 (Lys23) (D6Y7M) Rabbit mAb
溶酶(LZM)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒 葡萄座腔屬Phospho-Rpb1 CTD (Thr4) Antibody
端粒重復(fù)結(jié)合因子2(TERF2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒 綠色木霉AGPAT2 (D8W9B) Rabbit mAb
三葉因子1(TFF1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒無(wú)色殼囊孢Phospho-IKKα/β (Ser176/180) (16A6) Rabbit mAb (PE Conjugate)
三葉因子2(TFF2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒貝倫格葡萄座腔梨生?;蚆alonyl-Lysine [Mal-K] MultiMab? Rabbit mAb mix
色氨酰tRNA合成酶(WARS)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒枯草芽孢桿MST1 (D8B9Q) Rabbit mAb
色素上皮衍生因子(PEDF)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒類干酪乳桿Phospho-CD79A (Tyr182) (D1B9) Rabbit mAb (PE Conjugate)
山梨脫氫酶(SDH)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒毛栓孔TBC1D7 (D8K1Y) Rabbit mAb
Mg-ATP溶液100ml谷氨酸受體1(多肽)Anti-DECR2 Antibody豚鼠絲裂原激活蛋白激酶(MAPK)elisa檢測(cè)試劑盒
谷氨酸受體1抗原Anti-DEDD2 Antibody豚鼠血管**素(ANG)elisa檢測(cè)試劑盒
谷氨酸受體1Anti-DDX55 Antibody兔基質(zhì)衍生因子2(SDF-2)elisa檢測(cè)試劑盒
谷氨酸受體2C(多肽)Anti-DEFA4 Antibody兔巨噬移動(dòng)抑制因子(MIF)elisa檢測(cè)試劑盒
原癌基因抗原Anti-DFFA Antibody兔Fas凋亡抑制分子3(FAIM3)elisa檢測(cè)試劑盒
核因子2相關(guān)因子2抗原Anti-DGAT2L6 Antibody兔胱天蛋白酶11(CASP11)elisa檢測(cè)試劑盒
核呼吸因子-1抗原Anti-DFFB Antibody兔速激肽受體2(TACR2)elisa檢測(cè)試劑盒
鈉離子/?;悄懰峁厕D(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗原Anti-DGKA Antibody猴C4結(jié)合蛋白α(C4BPα)elisa檢測(cè)試劑盒
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來(lái)確定佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL;植物細(xì)胞20-200μg/mL;300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的濃度,可通過(guò)建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來(lái)實(shí)現(xiàn),至少選擇5個(gè)濃度。
1) 未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過(guò)夜;注:對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細(xì)胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
4) 接下來(lái)每3-4天更換新的含培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密,其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果,將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%
2) 每隔3-4天更換含有的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,這取決于宿主細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
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