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第2年
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細胞各形態(tài)分述 根據(jù)細胞是否貼附于支持物上生長,形態(tài)有所不同。呈懸浮生長時,不論細胞原來源于體內(nèi)何種類型細胞.由于生長在液體環(huán)境中,胞體基本呈圓形。大多數(shù)細胞是貼附型生長的。當(dāng)細胞貼附在支持物上后,細胞分化現(xiàn)象常變得不顯著,易失去它們在體內(nèi)時的原有特征.在形態(tài)上表現(xiàn)單一化的現(xiàn)象。貼附于支持物表面后,開始仍為圓形,但為時很短,很快便經(jīng)過形態(tài)演變過渡成扁平形態(tài)。1.成纖維細胞型:此細胞形態(tài)與體內(nèi)成纖維細胞的相似而得名發(fā)布時間:2023-05-18 11:34 點擊次數(shù):936 次
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ELISA試劑盒檢測樣本血清應(yīng)用注意事項 大部分elisa檢測均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按慣例方法收集,應(yīng)留意防止溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為符號的ELISA測定中,溶血標(biāo)本可能會添加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如有xi 菌污染,?菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會發(fā)生假陽性反應(yīng)。 一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃。超越一周測定的需-20℃保存。凍住血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,散發(fā)布時間:2023-05-09 11:39 點擊次數(shù):243 次
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ELISA移液技術(shù)注意要點 ELISA移液技術(shù)注意要點如下:1.移液時,槍頭應(yīng)對準(zhǔn)孔,避免接觸孔壁及底部。2.移液后輕輕晃動混勻試劑。3.如果您的樣品具有黏性,請預(yù)先潤洗槍頭以消除表面張力的影響。吸液時等待片刻使體積平衡后再取出。4.移液不充分或移液體積不均,說明移液器需要校正。必要時請檢查移液器并重新校正。5.加樣時,不同的試劑標(biāo)準(zhǔn)品和樣本間都要確保更換槍頭,避免交叉污染。6.確保使用合適的槍頭。不合適的槍頭無法正確量取吸發(fā)布時間:2023-05-06 13:31 點擊次數(shù):199 次
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PCR反應(yīng)引物純化的幾種方式選擇 PCR反應(yīng)引物純化的幾種方式選擇:1、脫鹽寡核苷酸合成后,為了純化寡核苷酸成為天然的DNA結(jié)構(gòu),首先必須去除保護基團。通過濃氨水處理,合成的寡核苷酸從固相載體上分離,2-氰乙氧基--磷酸二脂鍵的保護基團,以及堿基的保護基團基(苯甲?;彤惗』┍蝗コ瑥亩纬闪颂烊坏腄NA結(jié)構(gòu)。然而,必要的去保護步驟完成后,寡核苷酸混合物還包含幾種必須被去除的小分子有機化合物。所有非必須有機化合物被移除的過程通常發(fā)布時間:2023-04-25 11:12 點擊次數(shù):332 次
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PCR循環(huán)參數(shù)解析 循環(huán)參數(shù):1.預(yù)變性模板DNA完全變性與PCR酶的完全激活對PCR能否成功至關(guān)重要,建議加熱時間參考試劑說明書,一般未修飾的Taq酶激活時間為兩分鐘。2.變性步驟循環(huán)中一般95℃,30秒足以使各種靶DNA序列完全變性,可能的情況下可縮短該步驟時間。變性時間過長損害酶活性,過短靶序列變性不徹底,易造成擴增失敗。3.引物退火退火溫度需要從多方面去決定,一般根據(jù)引物的Tm值為參考,根據(jù)擴增的長度適當(dāng)下調(diào)發(fā)布時間:2023-03-22 11:11 點擊次數(shù):216 次
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體內(nèi)DNA復(fù)制和體外PCR擴增DNA不同點 不同點1、條件不同體內(nèi)DNA復(fù)制:以DNA雙鏈、細胞分裂環(huán)境為條件。體外PCR擴增DNA:以模板DNA、引物和4種脫氧核苷酸存在的條件。2、過程不同體內(nèi)DNA復(fù)制:是DNA雙鏈在細胞分裂以前的分裂間期S期進行復(fù)制,包括引發(fā)、延伸、終止的過程。體外PCR擴增DNA:是將待擴增的DNA片段與其兩側(cè)互補的寡核苷酸鏈引物經(jīng)高溫變性、低溫退火、引物延伸等多次循環(huán)過程。發(fā)布時間:2023-03-07 13:26 點擊次數(shù):2068 次
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PCR反應(yīng)?陰性對照出現(xiàn)明顯擴增分析 PCR反應(yīng)陰性對照出現(xiàn)明顯擴增1、 反應(yīng)體系組分(如水)被污染:實驗過程中,更換新的Mix或者水重復(fù)實驗。2、 標(biāo)本間的交叉污染或產(chǎn)物污染:反應(yīng)體系在超凈工作臺內(nèi)配制,對實驗室進行嚴(yán)格的區(qū)分,減少氣溶膠污染;使用帶濾芯的槍頭。3、 引物二聚體的出現(xiàn):引物設(shè)計不夠優(yōu)化:應(yīng)避免引物二聚體和發(fā)夾結(jié)構(gòu)的出現(xiàn)。4、引物濃度不佳:適當(dāng)降低引物的濃度,并注意上下游引物的濃度配比。在35循環(huán)后陰性對照出現(xiàn)擴增屬正發(fā)布時間:2023-03-01 15:44 點擊次數(shù):1309 次
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PCR的兩步法和三步法不同點 1、步驟不同:兩步法退火和延伸同時在60℃-65℃間進行,以減少一次升降溫過程,而三步法則分兩次完成。2、用時不同:兩步法減少一次升降溫過程,提高了反應(yīng)速度,用時較短。而三步法則比兩步法用時更長。3、適用條件不同:兩步法中,PCR擴增區(qū)很短,即使Taq酶活性不是zui佳也能在很短的時間內(nèi)復(fù)制完成。三步法的PCR擴增區(qū)則較長,需要降低系統(tǒng)溫度,引物與DNA模板結(jié)合,形成局部雙鏈。發(fā)布時間:2023-02-13 16:40 點擊次數(shù):180 次
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ELISA試驗洗板機洗板洗滌次數(shù)把控 洗板機洗板人為因素少,速度快,條件恒定,使用洗板機洗板時應(yīng)特別注意洗滌次數(shù)關(guān)鍵點。1、影響洗滌效果的主要參數(shù)是洗滌循環(huán)的量。當(dāng)然,洗滌次數(shù)越多,背景越低。然而,太多次的洗滌會降低信號強度,使其難以測定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復(fù)洗滌三次。不過,一般而言,包被平板需要的洗滌次數(shù)比用戶包被的平板要少。對于用戶包被的ELISA板,必須優(yōu)化洗滌次數(shù)。發(fā)布時間:2023-01-30 14:32 點擊次數(shù):153 次
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PCR反應(yīng)過程防止污染的方法 PCR反應(yīng)過程防止污染的方法:1、合理分隔實驗室:將樣品的處理、配制PCR反應(yīng)液、PCR循環(huán)擴增及PCR產(chǎn)物的鑒定等步驟分區(qū)或分室進行,特別注意樣本處理及PCR產(chǎn)物的鑒定應(yīng)與其它步驟嚴(yán)格分開。zui好能劃分①標(biāo)本處理區(qū);②PCR反應(yīng)液制備區(qū);③PCR循環(huán)擴增區(qū);④PCR產(chǎn)物鑒定區(qū)。其實驗用品及吸樣槍應(yīng)專用,實驗前應(yīng)將實驗室用紫外線消du以破壞殘留的DNA或RNA。2、吸樣槍:吸樣槍污染是一個值得注發(fā)布時間:2023-01-17 13:26 點擊次數(shù):218 次
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PCR退火(復(fù)性)溫度與時間 退火(復(fù)性)溫度與時間:退火溫度是影響PCR特異性的較重要因素。變性后溫度快速冷卻至40℃~60℃,可使引物和模板發(fā)生結(jié)合。由于模板DNA比引物復(fù)雜得多,引物和模板之間的碰撞結(jié)合機會遠遠高于模板互補鏈之間的碰撞。退火溫度與時間,取決于引物的長度、堿基組成及其濃度,還有靶基序列的長度。對于20個核苷酸,G+C含量約50%的引物,55℃為選擇zui適退火溫度的起點較為理想。引物的復(fù)性溫度可通過以下公式發(fā)布時間:2023-01-05 16:10 點擊次數(shù):4598 次
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小鼠ELISA試劑盒移液器的使用方法 小鼠ELISA試劑盒移液器的使用技巧: 1、設(shè)定移液體積:從小量程調(diào)節(jié)至大量程時,應(yīng)先調(diào)至超過設(shè)定體積刻度,再回調(diào)至設(shè)定體積,這樣可以保證移液器的精que度; 2、裝配槍頭:將移液槍垂直插入吸頭,左右旋轉(zhuǎn)半圈,上緊即可; 3、吸液和放液:吸頭浸入液面3mm以下,吸液前槍頭先在液體中預(yù)潤洗2-3次確保移液的精度和準(zhǔn)度,慢吸慢放,以防突然松開溶液吸入過快而沖入取液器內(nèi)腐蝕柱塞而造成漏氣; 4、吸有液體發(fā)布時間:2022-11-24 13:04 點擊次數(shù):192 次
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從外觀辨別胎牛血清方法 從外觀辨別胎牛血清方法如下:1、顏色根據(jù)血紅蛋白含量的不同,胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色,我國的細胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl,實際上,血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響,這個指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度,良好的操作能降低血清的溶血。國產(chǎn)血清的采血點很分散,大多是由屠戶采血后馬上離心收集,所以很少會有溶血,表現(xiàn)出明亮的蠟黃色,當(dāng)然,國產(chǎn)血清也很少有標(biāo)準(zhǔn)意義上的胎牛血清。進發(fā)布時間:2022-11-15 10:40 點擊次數(shù):193 次
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胎牛血清使用過程重要方法 胎牛血清為細胞生長提供必要的營養(yǎng)物質(zhì)。胎牛血清(FBS)是zui廣泛使用的細胞培養(yǎng)基生長補劑,因其含有大量的胚胎生長促進因子。它在使用過程的注意事項:1、注意避免沉淀加入培養(yǎng)液添加胎牛血清的時候要注意避免把沉淀加入培養(yǎng)液,因為如果培養(yǎng)液有沉淀的存在,會使得其中培養(yǎng)的細胞產(chǎn)生大量的黑點,除此之外,細胞的表面還很可能會覆蓋一層油狀物質(zhì),總之出現(xiàn)這樣的情況會極其不利于細胞的正常生長。那么為了zui大程度發(fā)布時間:2022-11-08 13:18 點擊次數(shù):363 次
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核酸檢測試劑盒實驗注意事項 核酸檢測試劑盒實驗注意事項:①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。⑥使發(fā)布時間:2022-11-03 10:21 點擊次數(shù):227 次