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服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱(chēng) |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
48T 0.1PCR管pCaMV35S基因PCR檢測(cè)試劑盒 |
48T 0.1PCR管 |
BH-P64304 |
它具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶(hù)只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針?lè)晒舛?RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見(jiàn)下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗人IgGRabbit Anti-human IgG/Alexa Fluor 488 0.1ml
Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗人IgGRabbit Anti-human IgG/Alexa Fluor 555 0.1ml
Cy3標(biāo)記的兔抗人IgGRabbit Anti-human IgG/Cy3 0.1ml
Cy5標(biāo)記的兔抗人IgGRabbit Anti-human IgG/Cy5 0.1ml
PE標(biāo)記的兔抗人IgGRabbit Anti-human IgG/PE 0.1ml
PE-Cy3標(biāo)記的兔抗人IgGRabbit Anti-human IgG/PE-Cy3 0.1ml
Cy5.5標(biāo)記的兔抗人IgGRabbit Anti-human IgG/Cy5.5 0.1ml
Cy7標(biāo)記的兔抗人IgGRabbit Anti-human IgG/Cy7 0.1ml
羅丹明標(biāo)記的兔抗人IgMRabbit Anti-human IgM/RBITC 0.3ml
生物素標(biāo)記的兔抗人IgMRabbit Anti-human IgM/Bio 0.3ml
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的兔抗人IgMRabbit Anti-human IgM/HRP 0.1ml
堿性磷酸酶(AP)標(biāo)記的兔抗人IgMRabbit Anti-human IgM/AP 0.1ml
膠體金標(biāo)記的兔抗人IgMRabbit Anti-human IgM/Gold 0.5ml
Cy3標(biāo)記的兔抗人IgMRabbit Anti-human IgM/Cy3 0.1ml
FITC標(biāo)記的兔抗人IgMRabbit Anti-human IgM/FITC 0.3ml
48T 0.1PCR管pCaMV35S基因PCR檢測(cè)試劑盒干姜對(duì)照藥材 CAS 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格: 1g
牛磺熊去氧膽酸 CAS 14605-22-2 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格: 20mg
雞血藤 CAS 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格: 2g
佩蘭 CAS 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格: 1g
阿奇 CAS 83905-01-5 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格: 200mg
布曲明 CAS 8488500-78 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格: 50mg
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薄芝絲體粉 CAS 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格: 2g
前激肽釋放酶激活劑國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品(PKA) CAS 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格: 926 IU/支
黑芝 CAS 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格: 1g
豬牙皂 CAS 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格: 1g
烏司他丁 CAS 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格: 1000u /瓶
美金剛 CAS 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格: 100mg
3,4亞甲基二氧基-N-鹽 CAS 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格: 20mg
川牛膝 CAS 訂購(gòu)|咨詢(xún) 規(guī)格: 2g
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。