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產(chǎn)品詳情

  • 產(chǎn)品名稱：RPMI-7951（人惡性黑色素瘤細(xì)胞

  • 產(chǎn)品型號(hào)：P-X9201
  • 產(chǎn)品**：派瑞曼
  • 產(chǎn)品價(jià)格：0
  • 折扣價(jià)格：0
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簡(jiǎn)單介紹：
RPMI-7951（人惡性黑色素瘤細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：REH急性非B非T細(xì)胞白血病細(xì)胞 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白13B抗體 AQP-1 ELISA Kit 水通道蛋白定量elisa kit 磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白25B抗體 SW982 [SW-982]滑膜肉瘤細(xì)胞
詳情介紹：

細(xì)胞接收后的處理：

1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。

RPMI-7951（人惡性黑色素瘤細(xì)胞

英文簡(jiǎn)稱

規(guī)格

貨號(hào)

RPMI-7951（

1×106

P-X9201

產(chǎn)品詳情：

種屬來(lái)源；人

性別年齡；女性，18歲

組織來(lái)源；皮膚

生長(zhǎng)特性；貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)；上皮樣

細(xì)胞規(guī)格；1 X 106cells/T25或1 mL凍存管

培養(yǎng)條件；EMEM + 10% FBS，37 ℃, 5% CO2

凍存條件；90% FBS + 10% DMSO

傳代方法；1:3傳代, 2-3天傳1代

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。


一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：

1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜

。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：
1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。 
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

實(shí)驗(yàn)原理：

公司正在出售的產(chǎn)品：

角蛋白KRT83抗體

石蠟切片組織PP2A蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒

KRT83

豚鼠白介素5(IL5)elisa檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞核酸結(jié)合蛋白抗體

體液HPV7（HUMAN PAPILLOMAVIRUS-7）病毒定性檢測(cè)試劑盒

CNBP/ZNF9

大鼠熱休克蛋白90-alpha(Hsp90aa1/Hsp86/Hspca)elisa檢測(cè)試劑盒

轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1抗體  Anti-TGF Beta 1/2/3

蔗糖磷酸化酶(SP)測(cè)試盒

核糖核酸酶抑制因子1抗體  Anti-Ribonuclease Inhibitor

腺苷A1A受體抗體 ADORA1

神經(jīng)激肽B抗體  Anti-NKB

心臟特異性絲氨酸蛋白酶抗體 Corin

血管活性腸肽受體-1抗體  Anti-VIP Receptor 1/VAPC1

白介素31受體a抗體 IL31RA

磷酸化叉頭蛋白家族1(Ser319)抗體 Phospho-FoxO1 (Ser319)

胞環(huán)蛋白肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體 Anillin

豬胃蛋白酶抗體 Pepsin A

CD5抗體 CD5

轉(zhuǎn)錄因子LMCD1抗體 LMCD1

C端結(jié)合蛋白1抗體 CTBP1

光導(dǎo)蛋白樣蛋白PDCL抗體 PHLP

磷酸化FANCD2抗體 phospho-FANCD2 (Ser222)

核呼吸因子-1抗體 NRF1

NMDA受體調(diào)節(jié)1樣蛋白抗體 NARG1L

myc蛋白抗體 Myc

RPMI-7951（人惡性黑色素瘤細(xì)胞溶質(zhì)載體轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族35成員D3抗體 SLC35D3

神經(jīng)細(xì)胞PAS結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體 NPAS2

細(xì)胞CDK3/CYCLIN E激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C）

人蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)elisa分析檢測(cè)試劑盒

小鼠全段甲狀旁腺素(i-PTH)elisa檢測(cè)試劑盒

實(shí)驗(yàn)步驟：

1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。


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