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英文簡稱
規(guī)格
貨號
HS746T:HS746T
1×106
P-X773
產(chǎn)品詳情:
細胞別稱:Hs 746T; HS 746T; Hs-746T; HS-746T; Hs746T; HS746T; Hs746-T; 746T
種屬來源:人
年齡性別:74歲
組織來源:胃;源自轉(zhuǎn)移部位:左腿
生長特性:貼壁生長
細胞形態(tài):上皮細胞樣
背景簡介:Hs-746T細胞是于1973年建系的;Hs-746T細胞的大小、形狀及核狀態(tài)均會在培養(yǎng)過程中發(fā)生變化。由于Hs-746T細胞的惡性化,染色多為亞三倍體(46%)。
生物等級:1
細胞規(guī)格:1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測:無
基因表達情況:
保藏機構(gòu):ATCC; HTB-135
培養(yǎng)基:DMEM+10% FBS+1% P/S
培養(yǎng)條件:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
凍存條件:無血清凍存液,液氮儲存
干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理:
1)收到細胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細胞狀態(tài),同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二.細胞處理:
1)凍存細胞的復(fù)蘇::將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:1、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當(dāng)延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3)細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例:
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實驗原理:
實驗步驟:
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上,利用293T細胞進行慢病毒包裝,獲得含目的基因的慢病毒;
2 轉(zhuǎn)染前24 h進行細胞鋪板,轉(zhuǎn)染時細胞密度控制在80%左右;
3 天加入適量病毒懸液感染細胞,并置于37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中孵育;
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基,并繼續(xù)培養(yǎng);
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng),直至顯微鏡下觀察熒光細胞比例為100%,獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系。
公司正在出售的產(chǎn)品:
狗15 - 酮基-13,14-二氫前列腺素F2α(15-keto-13,14-dihydro-PGF2α)elisa分析檢測試劑盒 |
肌球蛋白輕鏈激酶2抗體 MYLK2 |
14-dihydro-PGF2α ELISA kit |
絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶5抗體 PLK5 |
人單核細胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)elisa分析檢測試劑盒 |
1號染色體開放閱讀框227抗體 C1orf227 |
HumanMCP-3ELISAkit |
13號染色體開放閱讀框38抗體 C13orf38 |
絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1重組兔單克隆抗體 DUSP1 |
激肽釋放酶14抗體 KLK14 |
PerCP標(biāo)記人HLA-DR單克隆抗體 human HLA-DR/PerCP |
錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體 ANKRD26 |
PE標(biāo)記小鼠CD86單克隆抗體 mouse CD86/PE |
FAM13B1蛋白抗體 FAM13B1 |
磷脂酰基醇蛋白聚糖-6抗體 Glypican 6 |
FBXL18蛋白抗體 FBXL18 |
HHV6(HUMAN HERPESVIRUS 6)病毒 |
信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子4重組兔單克隆抗體 STAT4 |
人核糖核酸酶,核糖核酸酶A家族,(肝臟,嗜酸性粒細胞源性神經(jīng))(RNASE2)elisa分析檢測試劑盒 |
血管壁相連蛋白樣蛋白1抗體 GPBP1L1 |
大鼠環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)elisa檢測試劑盒免費代測 |
膽固醇25α7羥化酶抗體 CYP7B1 |
內(nèi)源性硫化氫H2S測試盒 50T/48樣 比色法 |
凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體 CARD4 |
小鼠白介素13(IL-13)elisa檢測試劑盒 |
細胞MAPK蛋白表達熒光定量檢測試劑盒 |
倉鼠瘦素(LEP)elisa分析檢測試劑盒 |
HS746T人胃癌細胞牛血清白蛋白(BSA)抗體(IgA)elisa分析檢測試劑盒 |
大鼠晚期氧化蛋白產(chǎn)物(AOPP)elisa檢測試劑盒 |
豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)elisa分析檢測試劑盒 |
體液氧化應(yīng)激活性氧(ROS)魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒 |
隨機引物DNA探針位素標(biāo)記產(chǎn)物完全雙鏈制備試劑盒 |