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英文名稱
A-204:A204
產(chǎn)品形態(tài)
上皮細(xì)胞樣 貼壁生長
貨號
P-X638
產(chǎn)品分類
人細(xì)胞系
規(guī)格
1×106
包裝
株
來源
橫紋肌
用途
僅供科研研究使用
產(chǎn)品詳情:
細(xì)胞別稱:A204;A-204;人橫紋肌肉瘤細(xì)胞
種屬來源:人
年齡性別:女;1年
組織來源:橫紋肌
生長特性:貼壁生長
細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣
背景簡介:A-204 [A204]細(xì)胞是源自一位患有橫紋肌肉瘤的1歲女孩的肌肉組織,由D·J·Giard建立。
細(xì)胞規(guī)格:1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測:無
基因表達(dá)情況:
保藏機(jī)構(gòu):ATCC; HTB-82 DSMZ; ACC-250;中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞資源中心
培養(yǎng)基:McCoy’s 5A+10%FBS+1%PS
培養(yǎng)條件:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
凍存條件:無血清凍存液,液氮儲存
倍增時間:~36 hours
STR鑒定位點Amelogenin:X;CSF1PO:10,13;D13S317:11,12;D16S539:11,12;D18S51:17,18;D19S433:12,13;D21S11:28,30;D2S1338:17,22;D3S1358:14,17;D5S818:12;D7S820:8,10;D8S1179:13,15;FGA:21;TH01:8,9.3;TPOX:8,9;vWA:15,17;
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理:
1)收到細(xì)胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二.細(xì)胞處理:
1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇::將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:1、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例:
1、細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實驗原理:
實驗步驟:
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上,利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝,獲得含目的基因的慢病毒;
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板,轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度控制在80%左右;
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞,并置于37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中孵育;
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基,并繼續(xù)培養(yǎng);
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng),直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%,獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。
公司正在出售的產(chǎn)品:
六磷酸肌醇激酶2抗體 |
ras基因相關(guān)蛋白Rab45抗體 RASEF |
IHPK2 |
幾丁質(zhì)酶1抗體 CHIT1 |
α-1-酸性糖蛋白2抗體 |
碳酸氫鈉協(xié)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5-A6抗體 SLC5A6 |
Alpha 1 acid glycoprotein 2 |
死亡相關(guān)蛋白激酶1抗體 DAPK1 |
鉀離子通道蛋白17抗體 KCNK17 |
RRP1B蛋白抗體 RRP1B |
1號染色體開放閱讀框80抗體 C1orf80 |
二磷酸葡萄糖神經(jīng)酰胺葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶2抗體 UGCGL2 |
3號染色體開放閱讀框17抗體 C3orf17 |
血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2抗體 ACE2 |
毒蕈堿樣蛋白3抗體 MBNL3 |
煙酰胺核苷酸腺苷轉(zhuǎn)移酶2抗體 NMNAT2 |
(folic acid)含量微生物比色法定量檢測試劑盒 |
鎂轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體 MAGT1 |
抑制與產(chǎn)生超氧陰離子自由基O2—·測試盒 50管/48樣 比色法 |
囊泡胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1家族蛋白抗體 VAT1L |
大鼠生長(GH)elisa檢測試劑盒 |
FbxW2蛋白抗體 FbxW2 |
體液蛋白氧化(羰基化;carbonyl)熒光檢測試劑盒 |
FRZB蛋白抗體 FRZB/FRP-3 |
小鼠活性氧(ROS)elisa檢測試劑盒 |
石蠟切片磷脂尼羅紅(Nile Red)直接熒光染色試劑盒 |
大鼠丙二酸單酰輔酶A(malonyl CoA)elisa檢測試劑盒 |
A-204人橫紋肌肉瘤細(xì)胞人白介素-23(IL-23)elisa檢測試劑盒 |
鮭魚elisa檢測試劑盒免費(fèi)代測 |
小鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra/CD121)elisa檢測試劑盒 |
細(xì)胞鈣ATP酶SERCA蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測試劑盒 |
大鼠 8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)elisa檢測試劑盒 |