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產(chǎn)品詳情

  • 產(chǎn)品名稱：AAV-293人胚腎細(xì)胞

  • 產(chǎn)品型號(hào)：P-X652
  • 產(chǎn)品**：派瑞曼
  • 產(chǎn)品價(jià)格：0
  • 折扣價(jià)格：0
  • 產(chǎn)品文檔：
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簡(jiǎn)單介紹：
AAV-293人胚腎細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：A875人黑色素瘤細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)成纖維細(xì)胞樣A875:A875人細(xì)胞系組織來源：皮膚大鼠5核苷酸酶(5-NT)elisa檢測(cè)試劑盒小鼠白介素6(IL－6)elisa檢測(cè)試劑盒
詳情介紹：

細(xì)胞接收后的處理：

1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。

AAV-293人胚腎細(xì)胞

英文簡(jiǎn)稱

規(guī)格

貨號(hào)

AAV-293:AAV293

1×106

P-X652

產(chǎn)品詳情：

生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

生長(zhǎng)培養(yǎng)基 DMEM＋10% FBS＋1% P/S

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

注意事項(xiàng) 該細(xì)胞貼壁松散，操作時(shí)請(qǐng)盡量輕柔；換液時(shí)需預(yù)熱培養(yǎng)基；收貨如有大塊脫落的細(xì)胞團(tuán)，為正?，F(xiàn)象，請(qǐng)按照收貨注意事項(xiàng)處理。

背景描述 AAV-293細(xì)胞源自普遍使用的293 [HEK-293]細(xì)胞株，但AAV-293細(xì)胞產(chǎn)生的病毒滴度更高。293 [HEK-293]細(xì)胞是剪切過的腺病毒5型DNA轉(zhuǎn)染的人胚腎細(xì)胞。跟293 [HEK-293]細(xì)胞一樣，AAV-293細(xì)胞反式表達(dá)腺病毒E1基因，當(dāng)共轉(zhuǎn)染三個(gè)AAV助質(zhì)粒(一個(gè)含ITR的質(zhì)粒、pAAV-RC和E1缺失助質(zhì)粒)時(shí)，AAV-293細(xì)胞可以產(chǎn)生有感染力的腺病毒-相關(guān)病毒顆粒；因此，我們推薦使用AAV-293細(xì)胞株繁殖腺病毒相關(guān)重組病毒。

年齡（性別） 胚胎

組織來源 腎；以腺病毒5DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)化

細(xì)胞類型 轉(zhuǎn)化細(xì)胞系

生物等級(jí) 2

保藏機(jī)構(gòu) NCBI_Iran; C548


干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。




一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：

1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜

。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：
1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

實(shí)驗(yàn)原理：

公司正在出售的產(chǎn)品：

NBEAL1蛋白抗體

魚11-酮類固醇elisa分析檢測(cè)試劑盒

NBEAL1

活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）檢測(cè)試劑盒

5號(hào)染色體開放閱讀框33抗體

HumanSema3AELISAKit

C5ORF33

人臂板蛋白3A(Sema 3A)elisa分析檢測(cè)試劑盒

鮭魚補(bǔ)體蛋白3(C3)elisa檢測(cè)試劑盒

Fish 11-Keto Steroid ELISA Kit

721型分光光度儀1毫升1厘米光徑塑料比色皿

NMT1

小鼠雌二醇受體(ER)elisa分析檢測(cè)試劑盒

生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白7抗體

豆蔻?；D(zhuǎn)移酶1抗體

GRB7

HRP標(biāo)記小鼠抗兔IgG H&L單克隆抗體

TIP30蛋白抗體  Anti-TIP30

Mouse Anti-Rabbit IgG mAb / HRP

蛋白激酶C α抗體  Anti-PKC alpha

FAM81A蛋白抗體

4-磷酸磷脂酰肌醇5激酶1樣蛋白抗體  Anti-PIP5KL1/PIPKH

FAM81A

蘋果14-3-3蛋白抗體(植物)  Anti-14-3-3 family protein

人Dicer-1 elisa分析檢測(cè)試劑盒

小鼠凝血因子VIIIa輕鏈(F8aLC)elisa分析檢測(cè)試劑盒

HumanDicer-1ELISAKit

AAV-293人胚腎細(xì)胞F8aLCELISAkit

大鼠β-轉(zhuǎn)導(dǎo)重復(fù)相容蛋白(β-TrCP)elisa分析檢測(cè)試劑盒

人黑色素細(xì)胞抗體(MC Ab)elisa分析檢測(cè)試劑盒

β-TrCP ELISA Kit

MCAbELISAKit

實(shí)驗(yàn)步驟：

1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。



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