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產(chǎn)品詳情

  • 產(chǎn)品名稱：人黑色素瘤細(xì)胞；A375.S2 (STR)

  • 產(chǎn)品型號(hào)：P-X10508
  • 產(chǎn)品**：派瑞曼
  • 產(chǎn)品價(jià)格：0
  • 折扣價(jià)格：0
  • 產(chǎn)品文檔：
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簡單介紹：
人黑色素瘤細(xì)胞；A375.S2 (STR)公司正在出售的產(chǎn)品：RBL-2H3大鼠嗜堿性白血病細(xì)胞 肽/天蠶素抗體 EPAS1 ELISA Kit 馬內(nèi)皮定量elisa kit 鉀通道相互作用蛋白3抗體 T47D乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞
詳情介紹：

細(xì)胞接收后的處理：

1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。

人黑色素瘤細(xì)胞；A375.S2 (STR)

英文簡稱

規(guī)格

貨號(hào)

A375.S2

1×106

P-X10508

產(chǎn)品詳情：

種屬來源；人

性別年齡；54 歲，女性

組織來源；皮膚

生長特性；貼壁生長

細(xì)胞形態(tài)；細(xì)胞樣

細(xì)胞規(guī)格；1 X 106cells/T25 或 1 mL 凍存管

培養(yǎng)條件；DMEM+ 10% Foetal Bovine Serum+1%P/S

凍存條件；90% FBS + 10% DMSO

傳代方法；1:3 傳代, 2-3 天傳 1 代


干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。




一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：

1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜

。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：
1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

實(shí)驗(yàn)原理：

公司正在出售的產(chǎn)品：

腫瘤壞死因子C/β抗體

人分泌型磷脂酶A2(sPLA2)elisa檢測試劑盒免費(fèi)代測

Lymphotoxin Beta

大鼠β-轉(zhuǎn)導(dǎo)重復(fù)相容蛋白(β-TrCP)elisa檢測試劑盒免費(fèi)代測

細(xì)胞色素P450 2C11抗體

小鼠高半胱氨酸(Hcy)elisa檢測試劑盒免費(fèi)代測

Cytochrome P450 2C11

體液鈉離子（Na）濃度化學(xué)比色法定量檢測試劑盒

多聚賴載玻片

骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)elisa分析檢測試劑盒

小鼠促腎上腺皮質(zhì)(ACTH)elisa檢測試劑盒免費(fèi)代測

腺嘌呤受體抗體 MRGPRA

果糖1，6-二磷酸醛縮酶（FDA）測試盒

鋅指蛋白181抗體 ZNF181

細(xì)胞化學(xué)AP酶聯(lián)NBT/BCIP間接檢測試劑盒（含AP二抗）

白細(xì)胞介素-2單克隆抗體 IL-2

磷酸化蛋白酪氨酸激酶BAP135抗體 phospho-TFII I (Tyr248)

苯甲酸肽水解酶β抗體 Meprin beta

轉(zhuǎn)錄激活蛋白CRSP9抗體 CRSP9

c-fos單克隆抗體 c-fos

轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1α抗體 TRIM24

DHX35蛋白抗體 DHX35

過氧化物酶-2重組兔單克隆抗體 PRDX2

磷酸化p21激活激酶4抗體 Phospho-PAK4 (Ser99)

核受體RXRα抗體 Retinoid X receptor alpha

NXP20蛋白抗體 NXP20

NBPF8蛋白抗體 NBPF8

人黑色素瘤細(xì)胞；A375.S2 (STR)乳腺癌易感基因2相關(guān)蛋白抗體 BRAF35

腎小球裂孔膜蛋白PDCN抗體 NPHS2

小鼠TGF-β誘導(dǎo)早期基因1(TIEG1)elisa檢測試劑盒免費(fèi)代測

通用型CHIP DNA分子克隆試劑盒

大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)elisa檢測試劑盒

實(shí)驗(yàn)步驟：

1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。



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