實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)； 

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說(shuō)明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。 

含SET域4(setd4)ELISA試劑盒硫代乙酸銨 試劑級(jí),70%溶液二乙烯苯 55%木犀草素

含patatin樣磷脂酶域3(PNPLA3/ADPN/C22orf20)ELISA試劑盒硫代乙酸 CP,85.0%乙基苯 >99.5%(GC)木犀草素（標(biāo)準(zhǔn)品）

過(guò)氧化脂質(zhì)/乳過(guò)氧化物酶(LPO)ELISA試劑盒鄰苯二甲酸二異辛酯 CP，98%乙酸甲酯  ≥99%(GC)熊果酸

過(guò)氧化脂質(zhì)(LPO)ELISA試劑盒鄰苯二甲酸二辛酯 GR甘氨酸 AR,99.5-100.5%熊果酸；烏蘇酸(標(biāo)準(zhǔn)品)

過(guò)氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)ELISA試劑盒鄰苯二甲酸二異辛酯 AR,99%三氯蔗糖  98%香葉木素

過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA試劑盒鄰苯二甲酸二異辛酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品, ≥99.5% (GC)烯酸叔丁酯 99%,含10-20 ppm MEHQ 作為穩(wěn)定劑香葉木素（標(biāo)準(zhǔn)品）

過(guò)氧化物酶體增殖激活物受體γ輔激活因子1α(PPARGC1)ELISA試劑盒鄰苯二甲酸二異辛酯  標(biāo)準(zhǔn)溶液1000μg/ml，溶劑：甲烯酸叔丁酯 standard for GC, ≥99.5% (GC)金雀花堿,野靛堿

過(guò)氧化氫酶(CAT)ELISA試劑盒鄰苯二甲酸二異辛酯 標(biāo)準(zhǔn)溶液500μg/ml，溶劑：甲1,8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯 99%金雀花堿,野靛堿（標(biāo)準(zhǔn)品）

過(guò)敏素/補(bǔ)體片斷4(C4a)ELISA試劑盒鄰苯二甲酸二辛酯 standard for GC, ≥99.5% (GC)N-(3-二甲氨基基)甲基烯酰 99%厄貝沙坦

果糖二磷酸縮酶A(ALDOA)ELISA試劑盒俾斯麥棕R Biological stain1,5-二氮雜雙環(huán)[4.3.0]-5-壬烯 98%5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯基)-胸苷-3'-O-丁二酸

果糖(FRA)ELISA試劑盒俾斯麥棕Y Biological stain烯酸異丁酯 99%水楊苷

果糖1,6二磷酸縮酶(FDA)ELISA試劑盒3-氯-4-氟苯 99%雞蛋白蛋白 98%水楊苷(標(biāo)準(zhǔn)品)

廣譜角蛋白(P-CK)ELISA試劑盒2,6-二氟苯 97%1,1-環(huán)己基二乙酸酐 98%厚樸酚

胱抑素SN(CST1)ELISA試劑盒2,6-二氟苯甲酸 分析標(biāo)準(zhǔn)品乙酰酮鋇 Ba ≥30.0 %厚樸酚(標(biāo)準(zhǔn)品)

胱抑素F(CST7)ELISA試劑盒2,6-二氟苯甲酸 98%硫柳汞鈉 AR,98%埃索美拉唑鎂(三水)

胱抑素B(CSTB/CST6/STFB)ELISA試劑盒順式-2,6-二甲基哌 98%鈉 AR蘆丁/蕓香葉苷
RL95-2 細(xì)胞凝結(jié)芽孢桿菌

種屬: Bacillus│coagulans

分離基物: 乳制品

提供形式: 凍干物

**等級(jí): 1

模式菌株: yes

應(yīng)用領(lǐng)域: 產(chǎn)糖苷水解酶抑制物、產(chǎn)L(+)乳酸

培養(yǎng)基: 348

嗜滲正青霉

種屬: Eupenicillium│osmophilum

分離基物: 土壤

提供形式: 凍干物

**等級(jí): 1

模式菌株: yes

培養(yǎng)基: CM0072

生長(zhǎng)條件: 25℃
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。

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