冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢(shì)：

1.具有多年的銷售經(jīng)驗(yàn)的行業(yè)背景，我司秉承質(zhì)量?jī)?yōu)先的理念，希望廣大科研工作者與我司達(dá)成長(zhǎng)期的合作關(guān)系；

2.公司不僅與各大高校、科研機(jī)構(gòu)以及**性企業(yè)有著合作關(guān)系，還與國(guó)際接軌，我司代理多種知名的國(guó)際品牌，如ATCC、DSMZ、Millipore、Abcam,Serva、Pharmacia、eBioscience,Santa，Abnova，GenWay等。

相關(guān)熱銷產(chǎn)品：

β膠原交聯(lián)(bCTx)ELISA試劑盒異 分析標(biāo)準(zhǔn)品，>99.7%(GC)DL-蘋果酸 AR，99.5%四乙酰核糖(>98% (HPLC),BC)

β-肌動(dòng)蛋白(β-actin)ELISA試劑盒異 >99.0% (GC)(含100ppm BHT穩(wěn)定劑)L-蘋果酸 98%酪氨酸脫羧酶

β-黑色素(β-MSH)ELISA試劑盒異佛爾酮 97%L-蘋果酸 CP維多利亞藍(lán) R

β黑色素(β-MSH)ELISA試劑盒異 ACS, ≥99.5% 順二酸 AR,99.5%α-酮戊二酸單鹽(>98%，BR)

β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒烯酸異癸酯 98%,含70-100ppm對(duì)苯二酚穩(wěn)定劑順二酸 CP,99%1-萘乙(>98%,BR)

β甘露糖苷酶(β Manase)ELISA試劑盒甲基烯酸月桂酯 96%順二酸 藥用級(jí)，EP,USP1-環(huán)己基二乙酸單酰(>98%，BR)

β-防御素3(β-BD-3)ELISA試劑盒α-甲基烯酸 >99.0%(GC),250ppm MEHQ做穩(wěn)定劑D-蘋果酸 99%三氮唑(>98%，BR)

β-防御素2(β-BD-2)ELISA試劑盒α-甲基烯酸 >99.0%(GC),250ppm MEHQ做穩(wěn)定劑單硬脂酸甘油酯 >60.0%(GC)1,2-乙二硫(>98.5%，BR)

β防御素2(β-BD-2)ELISA試劑盒甲基異丁(MIBC)  99%單硬脂酸甘油酯 99%(GC)1,3,5-三溴苯(>98%,BR)

β防御素104(DEFB104A)ELISA試劑盒乙酰乙酸甲酯 CP，98%L-半胱氨酸 ≥98%,非動(dòng)物源，用于培養(yǎng)1,3-二羥基萘(>98%,BR)

β防御素1(DEFB1)ELISA試劑盒甲基異丁酮 >99.5%(GC)安息香 99.5%1,3-二甲氧基苯(>98%,BR)

β防御素(β-Defensin)ELISA試劑盒壬基酚 GR聯(lián)苯甲酰 99.0%1,3-烷磺內(nèi)酯(>98%,BR)

β淀粉樣前體蛋白(β-APP)ELISA試劑盒壬基酚(混合物) SU安息香二甲 99%1,4-3,6-雙脫水甘露(>98%,BR)

β淀粉樣多肽42(Aβ 42)ELISA試劑盒壬基酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品1-羥環(huán)己基苯酮 98%1,4-環(huán)己二酮(>98%,BR)

β淀粉樣多肽42(ABeta 42)ELISA試劑盒對(duì)壬基酚 85%2-羥基-2-酮 97%1,4-二氨基蒽醌(>90%,BS)

β淀粉樣蛋白25-35(Aβ25-35)ELISA試劑盒對(duì)壬基酚 98%乙(95%) AR,95.0%1,4-二羥基蒽醌(>96%,BR)
大鼠脈絡(luò)膜成纖維細(xì)胞傳染性造血器官壞死病毒

種屬: 諾拉彈狀病毒屬│

分離基物: 病料

提供形式: 凍存管

**等級(jí): 3

模式菌株: yes

應(yīng)用領(lǐng)域: 基礎(chǔ)研究

培養(yǎng)基: MEM+5%FBS

釀酒酵母

種屬: Saccharomyces│cerevisiae

提供形式: 凍干物

**等級(jí): 1

模式菌株: no

應(yīng)用領(lǐng)域: 用于酒精發(fā)酵。

培養(yǎng)基: CM0077

生長(zhǎng)條件: 25℃

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