實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)； 

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說(shuō)明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。 

β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)ELISA試劑盒對(duì)壬基酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品，異構(gòu)體混合物乙(95%) CP,95.0%對(duì)二甲氧基苯(>98%,BR)

β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)ELISA試劑盒對(duì)壬基酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品,純品乙(95%)  for HPLC1,5-二氨基萘(>98%,BR)

β淀粉樣蛋白(Aβ)ELISA試劑盒正 AR,97%乙(95%) GR,95.0%        1,5-二羥基萘(>97%,BR)

β-促脂素(β-LPH)ELISA試劑盒正 CP,95%乙(95%)  ACS1,6-二羥基萘(>98%,BR)

β半乳糖苷酶(β-GAL)ELISA試劑盒正 Standard for GC，>99%(GC)95%藥用酒精 藥用級(jí)1,8-辛二(>98%,BR)

β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA試劑盒乙酸正酯 AR,99.0% 95%乙 光譜純1-萘乙酮(>95%，BR)

β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)ELISA試劑盒甲醋酸酯 99%高哌 98%1-溴金剛烷(>99%,BR)

β4整合素(ITG β4/CD104)ELISA試劑盒乙二  99.4%2-基吡啶 98%烯基硫脲(>98%,BR)

β2轉(zhuǎn)鐵蛋白(β2TF)ELISA試劑盒正 CP,98.5% 乙基黃原酸 AR，95%1-溴3-氯烷(>97%,BR)

β2整合素(ITG β2/CD11+CD18)ELISA試劑盒聚乙烯吡咯烷酮 平均分子量 8000, K16-18乙基黃原酸 98%溴代庚烷(>98%,BR)

β2微球蛋白(β2-MG)ELISA試劑盒三氯乙烯 CP,98.5%2-氨基嘧啶 98%1-溴代萘(>98%,BR)

β2微球蛋白(MGβ2)ELISA試劑盒1,2,3,4-四氫萘 CP2-(3-氯苯氧基)酸 98%溴辛烷(>98%,BR)

β2微球蛋白(BMG/β2-MG)ELISA試劑盒1,2,3,4-四氫萘 AR，97%1-甲酰 99%1-甲基咪唑(>98%,BR)

β2糖蛋白1抗體IgM(β2-GP1 Ab IgM)ELISA試劑盒1,2,3,4-四氫萘 Standard for GC, ≥99.5% (GC)3-吡啶甲 98%1-乙基咪唑(>98%,BR)

β2糖蛋白1抗體IgG(β2-GP1 Ab IgG)ELISA試劑盒1,2,3,4-四氫萘  >98.5%(GC)反-玉米素 98%1-萘乙(>98%,BR)

β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)ELISA試劑盒1,2,3,4-四氫萘 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥99.5% (GC)偏釩酸銨 CP，98%乙酸-1-萘酯(>98%,BR)
大鼠脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞熱帶假絲酵母

種屬: Candida│tropicalis

提供形式: 斜面培養(yǎng)物

**等級(jí): 1

模式菌株: no

應(yīng)用領(lǐng)域: 飼料

培養(yǎng)基: 13

生長(zhǎng)條件: 28℃

海氏腸球菌

種屬: Enterococcus│hirae

提供形式: 凍干物

**等級(jí): 1

模式菌株: yes

應(yīng)用領(lǐng)域: 模式菌株

培養(yǎng)基: 0214

生長(zhǎng)條件: 37℃
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。

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