實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)； 

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說(shuō)明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。 

E3泛素蛋白連接酶TRIM68(TRIM68)ELISA試劑盒AR,99.5%反,反-2,4-庚二烯 90%加拿大香脂

D-乳酸脫氫酶(D-LDH)ELISA試劑盒CP,99.5%三硫酮 ≥99%, FG正己酸(>98%，BR)

D二聚體(D2D)ELISA試劑盒GR,99.8%4-羥基-3-甲氧基苯甲 98%己內(nèi)酰(>98%，BR)

DNA損傷誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子4樣蛋白(DDIT4/RTP801)ELISA試劑盒PT,99.8%六氯酮 99%羧肽酶 Y >50 U /mg

DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3A(DNMT3A)ELISA試劑盒光譜級(jí)2-異基-4-甲基噻唑 98%蓖麻油

DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1(DNMT1)ELISA試劑盒用于和昆蟲培養(yǎng)，≥99.5% (T)3-甲基-1-丁硫 97%1,1-環(huán)己基二乙酸

DnaJ同源亞科B成員1(DNAJB1/DNAJ1/HDJ1/HSPF1)ELISA試劑盒for HPLC, ≥99.5% (AT)甜瓜 80%反式-1,2-環(huán)己二四乙酸(>98%，BR)

Dickkopf相關(guān)蛋白1(DKK1)ELISA試劑盒用于植物培養(yǎng), ≥99.5%2-甲基庚酸  98%乙酸纖維素

Dickkopf 3(DKK3)ELISA試劑盒USP香草酸甲酯 99%乙酸鈰(>99%，BR)

Dickkopf 1(DKK1)ELISA試劑盒≥99.999% (metals basis)4-甲硫基-4-甲基-2-戊酮 99%硫酸鈰四水(>99%，BR)

DAB2互作蛋白(DAB2IP)ELISA試劑盒農(nóng)殘級(jí), ≥99.5%4-甲基-4-巰基-2-戊酮 98%碳酸銫(>99%，BR)

C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族4成員E(CLEC4E)ELISA試劑盒用于分子生物學(xué), ≥99.5% (AT)3-甲硫基-1-己 99%滂天藍(lán)(~50%,BS)

C型鈉尿肽(CNP)ELISA試劑盒99.99% metals basis3-巰基-1-己 98%氯銨-T三水(>98%,BR)

C肽(C-Peptide)ELISA試劑盒氯化 GR,99.8%3-甲基-2--1-硫 98%卡拉唑黑E(>70%,BS)

C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒氯化 AR,99.5%2-甲基-3-呋喃硫 95%氯金酸三水

C多肽(CP)ELISA試劑盒氯化 CP,99.5%2-甲基四-3-硫 97%氯鉑酸六水
大鼠纖維環(huán)細(xì)胞弗勞地拘櫞酸桿菌

種屬: Citrobacter│freundii

提供形式: 其他

**等級(jí): 3

模式菌株: no

培養(yǎng)基: CM0051

生長(zhǎng)條件: 37℃

存儲(chǔ)條件: -80℃冰箱凍結(jié)法

小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌

種屬: Yersinia│enterocolitica

提供形式: 凍干物

**等級(jí): 2

模式菌株: no

應(yīng)用領(lǐng)域: 血清學(xué)分群(型)　41,42　生物1

培養(yǎng)基: CM0116

生長(zhǎng)條件: 37℃
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。

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