冷凍保存細胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器備。

培養(yǎng)操作：

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢：

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相關熱銷產(chǎn)品：

CD146分子(CD146)ELISA試劑盒2-氯-3-甲基吡啶-5-酸 95%2-基硫 96%5'-三磷酸胞苷三鈉鹽

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CC趨化因子5(CCL5/D17S136E/SCYA5)ELISA試劑盒2,3-二氯吡啶-4-酸 95%香草酸 98%癸二酸(>96%，BR)

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CCAAT增強子結(jié)合蛋白δ(C/EBPδ)ELISA試劑盒2,6-二氯吡啶-3-酸 95% 1，2-環(huán)己二 99%脫羰秋水仙堿

CCAAT增強子結(jié)合蛋白α(C/EBPα)ELISA試劑盒2,5-二氯吡啶-3-酸 95%反式-1，2-環(huán)己二四乙酸,一水 99%DON素，嘔吐素；脫氧雪腐鐮刀菌烯(>98%(HPLC),BR)

cAMP反應元件結(jié)合蛋白(CREB)ELISA試劑盒2,5-二氯吡啶-4-酸 95%卡鉑 98%第威德合金

Ca2+激活K+通道蛋白2(KCNN2)ELISA試劑盒2,6-二酸 98%反式-1.2-環(huán)己二四乙酸 98%二乙酰一肟(>98%，BR)

C4結(jié)合蛋白(C4BP)ELISA試劑盒2,4-二甲氧基嘧啶-5-酸 90%順鉑 Pt, 65%二丁基二月桂酸錫(>95%,BR)
大鼠牙髓干細胞木賊鐮孢

種屬: Fusariumequiseti

分離基物: 花菜籽

**等級: 1

模式菌株: no

應用領域: 轉(zhuǎn)化甾體**

培養(yǎng)基: 14,17

生長條件: 25~28℃

肉桂色曲霉

種屬: Aspergillus│cinnamomeus

提供形式: 斜面培養(yǎng)物

**等級: 1

模式菌株: no

培養(yǎng)基: CM0015

生長條件: 28℃

存儲條件: 真空冷凍干燥法

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