內(nèi)參Ct值比目的基因Ct值還要高？

1. Ct值在12～32之間均可；

2. Ct值由基因豐度和cDNA稀釋倍數(shù)決定；

3. 設(shè)NTC排除基因組污染，或RNA用Dnase處理，或使用跨內(nèi)含子引物；

4. 測RNA時OD值影響因素很多，如果整個上樣液都用DEPC水，A260/A280大于1.6是可以接受的（1.5的也做得出！）；A260/A230當(dāng)然*好大于2.0。特別注意到是上樣稀釋不要太稀，單個OD值（尤其是A260）小于0.1（不同等機(jī)器不同，我們這里用的eppendof的）結(jié)果不可靠，這個影響對A260/A280的影響似乎更大！當(dāng)然你不放心*好再純化一下：）