目前已研發(fā)了完全無血清和無動物源蛋白成分的新型合成培養(yǎng)基,這種培養(yǎng)基可以在高密度細(xì)胞培養(yǎng)的條件下,滿足細(xì)胞的生長,滿足細(xì)胞轉(zhuǎn)染的條件,從而可以進(jìn)行大規(guī)模重組蛋白的制備。
同時Polyplus公司也專門研發(fā)用于轉(zhuǎn)染細(xì)胞來制備重組蛋白的轉(zhuǎn)染試劑——Fecturin。Fecturin轉(zhuǎn)染試劑可以在上面描述的新型合成培養(yǎng)基中,進(jìn)行非貼壁細(xì)胞或貼壁細(xì)胞的瞬時轉(zhuǎn)染。
由于Fecturin為化學(xué)合成物,因此不含任何動物源成分(如:蛋白或多肽)。實驗證明在不同的合成培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)的HEK-293和CHO細(xì)胞,經(jīng)Fecturin轉(zhuǎn)染后,能得到高產(chǎn)量的重組蛋白制備。這里舉例給大家介紹:
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Fecturin轉(zhuǎn)染細(xì)胞1d后,可在FS合成培養(yǎng)基中收集到高水平分泌的VEGF(400ng VEGF/106 cells/day)。
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Fecturin轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞后,4d內(nèi)每天分泌的VEGF表達(dá)量不斷增加
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使用Fecturin可以輕松擴(kuò)大懸浮培養(yǎng)CHO細(xì)胞中蛋白的產(chǎn)量。Fecturin可用于在500ml培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)的CHO細(xì)胞中轉(zhuǎn)染,制備重組蛋白產(chǎn)品(如VEGF產(chǎn)量達(dá)10ug VEGF/106 cells/ml/ day )。因此隨著培養(yǎng)基體積的增加,每ml培養(yǎng)基中重組蛋白的產(chǎn)量也隨之顯著增加