DNA提取 :一、pAG415GAL-ccdB-EYFP實(shí)驗(yàn)原理
DNA是遺傳信息的載體,是*重要的生物信息分子,因此DNA的提取也是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)中*重要、*基本的操作之一。我公司提供從各種不同來源的樣品(如**、**、血液、培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物組織及植物組織等)中提取高純度基因組DNA的服務(wù)。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1、細(xì)胞裂解
● CTAB法 CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基**基溴化銨)是一種陽離子去污劑,可融解細(xì)胞膜,并與核酸形成符合物。該復(fù)合物在高鹽溶液中(>0.7M NaCl)是可溶的,pAG415GAL-ccdB-EYFP通過有機(jī)溶劑抽提,去除蛋白、多糖、酚類等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來。此法多用于植物組織、**等材料。
● SDS法 SDS是一種陰離子去污劑,高溫(55℃-65℃)下可裂解細(xì)胞,使蛋白變性、染色體解析。常用于血液、**、酵母、動(dòng)物組織、細(xì)胞等樣品基因組DNA的提取。
● 其他方法 物理方法如機(jī)械剪切、超聲波破碎、勻漿等,化學(xué)方法如異硫氰酸胍、堿裂解、蛋白酶K消化等。
2、DNA分離純化
● 用酚/氯仿抽提裂解液,收集水相,乙醇沉淀DNA,*后用TE溶解DNA沉淀。
3、DNA的定量及檢測(cè)
● pAG415GAL-ccdB-EYFP瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA片段的分子質(zhì)量。
● 紫外分光光度計(jì)檢測(cè)DNA濃度 DNA在OD260處有顯著吸收峰,OD260值為1相當(dāng)于大約50ug/ml雙鏈DNA。提取的基因組DNA樣品濃度=OD260×50ug/ml×稀釋倍數(shù)。
● 紫外分光光度計(jì)檢測(cè)DNA純度
一般用OD260/OD280值檢測(cè)DNA樣品的純度。OD260/OD280值約為1.7-1.9,說明DNA純度較好;若小于1.7有可能有蛋白污染;若大于2.0,說明有RNA污染或DNA已經(jīng)降解。
三、pAG415GAL-ccdB-EYFP樣品處理
因細(xì)胞結(jié)構(gòu)及所含成分不同,樣品預(yù)處理的方法也有差異。不同樣品的預(yù)處理方法大致如下:
● 植物組織——液氮研磨
● 動(dòng)物組織——?jiǎng)驖{、液氮研磨
● 培養(yǎng)細(xì)胞——蛋白酶K消化
● 細(xì) 菌——溶菌酶消化
● 酵 母——Lyticase消化、玻璃珠破碎
pAG415GAL-ccdB-EYFP注意:客戶*好提供新鮮的樣品或取樣后立即在低溫(-20℃或-70℃)冷凍保存的樣品,避免反復(fù)凍溶。
XY021 玉米Bt176/MS RT-PCR檢測(cè)試劑盒 40次/盒
XY022 玉米Bt176/Total Plant DNA RT-PCR檢測(cè)試劑盒 40次/盒
XY023 玉米Bt11/MS RT-PCR檢測(cè)試劑盒 40次/盒
XY024 玉米Bt11/Total Plant DNA RT-PCR檢測(cè)試劑盒 40次/盒
XY025 玉米MON810/MS RT-PCR檢測(cè)試劑盒 40次/盒
XY026 玉米MON810/Total Plant DNA RT-PCR檢測(cè)試劑盒 40次/盒
XY027 玉米GA21/MS RT-PCR檢測(cè)試劑盒 40次/盒
XY028 玉米GA21/Total Plant DNA RT-PCR檢測(cè)試劑盒 40次/盒
XY029 大米Bt63 RT-PCR檢測(cè)試劑盒 40次/盒
XY030 大米Cry1Ac RT-PCR檢測(cè)試劑盒 40次/盒
XY101104 3'-RACE試劑盒 10次
XY101105 5'-RACE試劑盒 10次
XY130412 eTS 核心試劑盒 10次
XY130702 p19 siRNA 結(jié)合蛋白 1000U
XY130703 p19 miRNA 檢測(cè)試劑盒 100次
XY131039 即用型EMSA試劑盒 100次
- 溫馨提示:為規(guī)避購(gòu)買風(fēng)險(xiǎn),建議您在購(gòu)買前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)與產(chǎn)品質(zhì)量。
- 免責(zé)申明:以上內(nèi)容為注冊(cè)會(huì)員自行發(fā)布,若信息的真實(shí)性、合法性存在爭(zhēng)議,平臺(tái)將會(huì)監(jiān)督協(xié)助處理,歡迎舉報(bào)