足突蛋白(PDCN)重組蛋白
來源: 原核表達
宿主:E.coli
內**水平:<1.0EU/μg(LAL法測定)
亞細胞定位:Secreted
預測分子量:15.7kDa
實際分子量:-(差異分析請參閱說明書)
片段與標簽:Thr21~Pro152 (Accession # Q6ISS4) with N-terminal His Tag
緩沖液成份磷酸鹽緩沖液:(pH7.4,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.)
性狀:凍干粉
純度> 95%
等電點:5.5
應用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.如果需要有生物活性的蛋白,請參見活性蛋白。
規(guī)格:10μg 50μg 200μg 1mg 1g
足突蛋白(PDCN)重組蛋白實驗步驟:
1.設計目的重組蛋白質的N端10-15個氨基酸的簡并序列。
2.引物合成上述簡并序列,同時設計合成目的基因反向引物。
3.PCR擴展目的基因,這樣在目的基因的5‘端就引入了兼并序列,同時不改變氨基酸序列。
4.雙酶切,插入到目標載體。
5.轉化。
6.挑選多個克隆(比如100-200個)到1.5ml EP管,直接誘導表達(記得帶上為改造克隆菌株的對照)。
7.SDS-PAGE檢測。
8.挑選高表達的多個克隆,測序。
足突蛋白(PDCN)重組蛋白的表達策略優(yōu)點和缺點:
足突蛋白(PDCN)重組蛋白分離純化原則總結:
1.應盡可能利用蛋白質不同物理特性選擇所用的分離純化技術,而不是利用相同技術多次純化;
2.不同的蛋白在性質上有很大區(qū)別,每一步純化步驟都應當充分利用目的蛋白和雜質成分物理性質差異;
3.在純化早期階段要盡量減少處理體積,方便后續(xù)純化;
4.在純化后期階段,再使用造價高的純化方法,有利于純化材料的重復使用,減少再生復雜性。
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