GST標(biāo)簽蛋白純化試劑盒

      GST標(biāo)簽蛋白純化試劑盒(GST-tag Protein Purification Kit)，俗稱GST柱試劑盒，是一種采用了新型的BeyoGold? GST-tag Purification Resin，并能簡(jiǎn)單、快速、高效并且高特異性地純化GST標(biāo)簽蛋白的試劑盒。
      試劑盒提供了GST標(biāo)簽蛋白純化所需的相關(guān)試劑和親和層析柱空柱管，為GST標(biāo)簽蛋白的純化帶來了極大的便利。
      GST，即谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶，與目的蛋白融合表達(dá)后，被稱為GST標(biāo)簽重組蛋白、GST標(biāo)簽蛋白或GST融合蛋白。GST標(biāo)簽重組蛋白可以通過GST特異性地結(jié)合到BeyoGold? GST-tag Purification Resin，而其它蛋白則不能被結(jié)合，含GST標(biāo)簽的重組蛋白可被過量的還原型谷胱甘肽(GSH)溶液洗脫，從而實(shí)現(xiàn)GST標(biāo)簽蛋白的分離和純化。由于純化過程始終保持在溫和的非變性條件下，得到的目的蛋白可以保持其自身的生物學(xué)活性，因此可以用于常規(guī)的結(jié)構(gòu)和功能研究、抗體制備、以及蛋白與蛋白相互作用、蛋白與核酸相互作用等方面的研究。
      本試劑盒不僅可以用于大腸桿菌表達(dá)的GST標(biāo)簽重組蛋白的純化，也可以用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞及桿狀病毒等其它表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)的GST標(biāo)簽重組蛋白。
      GST標(biāo)簽重組蛋白在大腸桿菌中表達(dá)時(shí)具有可溶性高，并且容易保持目的蛋白完整活性等優(yōu)點(diǎn)。許多真核蛋白在大腸桿菌中是以包涵體的形式表達(dá)的，但當(dāng)它們?cè)诖竽c桿菌中與GST融合表達(dá)時(shí)，相當(dāng)一部分可以實(shí)現(xiàn)可溶性表達(dá)，從而有利于后續(xù)的純化。
      如果在GST標(biāo)簽和目的蛋白之間含有位點(diǎn)特異性的蛋白酶識(shí)別位點(diǎn)，如PreScission Protease, TEV Protease或Thrombin等，則可用相應(yīng)的蛋白酶切除GST標(biāo)簽。
      通常在目的蛋白的N端加上GST標(biāo)簽可以保留GST的酶活性，從而便于使用BeyoGold? GST-tag Purification Resin進(jìn)行GST標(biāo)簽重組蛋白的純化。
      本試劑盒中的BeyoGold? GST-tag Purification Resin采用了一種高度交聯(lián)的6%瓊脂糖凝膠(Sepharose CL-6B)為基質(zhì)，并使用了進(jìn)一步優(yōu)化的接臂和GSH偶聯(lián)技術(shù)，可以高容量、高特異性地結(jié)合GST標(biāo)簽重組蛋白。和目前市售的大多數(shù)同類產(chǎn)品相比，非特異性蛋白結(jié)合更低，耐受壓力更強(qiáng)，GSH的偶聯(lián)更加穩(wěn)定。
      BeyoGold? GST-tag Purification Resin凝膠的顆粒直徑為45-165μm?？赡褪艿?大壓力為0.025MPa，約合5.8psi。采用固定流速進(jìn)行蛋白純化時(shí)的推薦流速為0.5ml/min。
      BeyoGold? GST-tag Purification Resin儲(chǔ)存在20%乙醇中，10ml總體積中5ml為凝膠，5ml為液體。使用時(shí)宜把凝膠充分重懸后再吸取。
      BeyoGold? GST-tag Purification Resin對(duì)含GST標(biāo)簽重組蛋白的結(jié)合容量大，其對(duì)GST*大結(jié)合量為5-6mg蛋白/毫升凝膠，與國際知名品牌的同類產(chǎn)品結(jié)合容量相當(dāng)。實(shí)際使用時(shí)的*大結(jié)合量取決于待純化的GST標(biāo)簽重組蛋白的分子量大小，分子量越大則*大結(jié)合容量越大，分子量越小則*大結(jié)合容量越小。對(duì)于目的蛋白分子量為50kD的GST標(biāo)簽重組蛋白，每毫升凝膠的實(shí)際*大純化量約為8-12mg，對(duì)于目的蛋白分子量為100kD的GST標(biāo)簽重組蛋白，每毫升凝膠的實(shí)際*大純化量約為12-18mg。但對(duì)于分子量相同的蛋白，也會(huì)因?yàn)榈鞍妆旧硖匦缘牟煌Y(jié)合的*大容量也會(huì)有所不同。
      一個(gè)包裝的本產(chǎn)品*多可純化10種帶有GST標(biāo)簽的重組蛋白，每種蛋白的*大純化量約為12mg。對(duì)于目的蛋白分子量為50kD的GST標(biāo)簽重組蛋白，一個(gè)包裝的本產(chǎn)品實(shí)際*多可純化10種約4-6mg蛋白。在不使用親和層析柱空柱管的情況下，參考本說明書，本試劑盒足夠進(jìn)行500次的小量GST標(biāo)簽蛋白純化。
包裝清單：

保存條件：
      4℃保存，至少一年有效。除BeyoGold? GST-tag Purification Resin外，其余均可以-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
      請(qǐng)勿在-20℃或更低溫度冷凍保存BeyoGold? GST-tag Purification Resin。
      BeyoGold? GST-tag Purification Resin保存和純化過程中應(yīng)始終保持凝膠濕潤(rùn)。
      有多種不同容量的親和層析柱空柱管(FCL01/FCL03/FCL06/FCL12/FCL30/FCL60)，可以和本產(chǎn)品配合使用。
      若離心不能完全除去蛋白樣品中的不溶物，可以將樣品溶液用0.45μm的濾膜過濾。
      GST標(biāo)簽蛋白的純化應(yīng)始終保持在非變性條件下，如果融合蛋白以包涵體形式表達(dá)，在使用8M尿素或6M鹽酸胍溶解包涵體后，需要通過透析去除尿素和鹽酸胍并使蛋白復(fù)性后才能使用本產(chǎn)品進(jìn)行純化。
      蛋白樣品收集后宜盡快完成純化工作，并應(yīng)始終放置在4℃或冰浴，以減緩蛋白降解。為有效抑制蛋白降解，可以在裂解液中添加適量的蛋白酶抑制劑混合物，例如的P1025/P1026蛋白酶抑制劑混合物(**抽提用)，或P1005/P1006蛋白酶抑制劑混合物(通用型)。
      本產(chǎn)品**于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或**，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
      為了您的**和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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