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第2年
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選擇合適的血清的方式指引 血清是細胞培養(yǎng)中唯yi外源添加的成分不確定的物質(zhì)，血清的質(zhì)量對實驗成敗起著關(guān)鍵性作用，但血清使用不當也可能會導致血清質(zhì)量下降，造成細胞培養(yǎng)效果不理想。怎樣為您的細胞選擇合適的血清？目前市面上的血清產(chǎn)品五花八門，各種品牌宣稱來自各個血源地，讓人眼花繚亂?？梢源_定的是，除了所謂的“水貨"，它們當中絕大多數(shù)都是質(zhì)量合格的產(chǎn)品。但合格不一定好用，或者說適用于某一種細胞。要確定一款血清的性能，或者從眾多血清發(fā)布時間：2023-09-19 11:19 點擊次數(shù)：125 次
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大鼠鐵調(diào)素elisa定量檢測試劑盒實驗雙抗體夾心法步驟 大鼠鐵調(diào)素elisa定量檢測試劑盒實驗雙抗體夾心法(檢測未知抗原)步驟:1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次。2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。3、加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0發(fā)布時間：2023-09-14 10:34 點擊次數(shù)：117 次
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PCR引物的延伸解讀 DNA模板-引物復合物在Taq DNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復制原理，合成一條與模板DNA鏈互補的新鏈。引物延伸溫度的選擇取決于DNA聚合酶的zui 適溫度,一般為70～75℃。延伸所需要的時間取決于模板DNA的長度。一般在72℃條件下，Taq DNA聚合酶催化的合成速度大約為40～60個堿基/秒,其速度取決于緩沖溶液的組成、ph值、鹽濃度與DN發(fā)布時間：2023-09-08 11:51 點擊次數(shù)：313 次
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凍存原代細胞的培養(yǎng) 凍存原代細胞的培養(yǎng)：1.將一管細胞從液氮罐中取出，注意保護手和眼睛。2.將凍存管快速的放入37℃水浴中，輕輕握住并旋轉(zhuǎn)，直到管內(nèi)物體完全融化。3.將凍存管立即從水浴中拿出，擦干，轉(zhuǎn)入無菌環(huán)境。4.用70％的酒精沖洗凍存管，然后擦去多余酒精。5.打開蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋（注意，由于凍存管有負壓，開蓋時可能會有少量溢出，這是正?，F(xiàn)象）。6.用多聚賴氨酸包被培養(yǎng)瓶。多數(shù)細胞推薦的接種密度為每發(fā)布時間：2023-08-29 10:49 點擊次數(shù)：133 次
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緩沖溶液應用原理 由弱酸HA及其鹽NaA所組成的緩沖溶液對酸的緩沖作用，是由于溶液中存在足夠量的堿A-的緣故。當向這種溶液中加入一定量的強酸時，H+離子基本上被A-離子消耗：所以溶液的pH值幾乎不變；當加入一定量強堿時，溶液中存在的弱酸HA消耗OH-離子而阻礙pH的變化。在緩沖溶液中加入少量強酸或強堿，其溶液pH值變化不大，但若加入酸，堿的量多時，緩沖溶液就失去了它的緩沖作用。這說明它的緩沖能力是有一定限度的。緩沖發(fā)布時間：2023-08-23 16:36 點擊次數(shù)：122 次
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細胞凍存和復蘇的時間把控 細胞凍存和復蘇的時間把控：細胞在體外生長期間，通常分為三個階段：潛伏期、指數(shù)生長期和平臺期。潛伏期通常是細胞剛剛傳代，此時細胞開始貼附基質(zhì)和伸展骨架，代謝活動集中在粘附蛋白和骨架蛋白的表達，細胞數(shù)量在這段時間內(nèi)幾乎沒有增加。隨后，細胞開始指數(shù)生長期，轉(zhuǎn)錄翻譯過程旺盛，胞內(nèi)物質(zhì)、信號傳遞迅速，細胞數(shù)量迅速增長。如果在這個時期凍存，實際上是強行將細胞凍結(jié)在代謝的某一時刻，勢必造成對解旋的DNA、轉(zhuǎn)錄翻發(fā)布時間：2023-08-16 13:34 點擊次數(shù)：170 次
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ELISA試劑盒保存條件 ELISA試劑盒保存條件：1、有效期內(nèi)的試劑如開封后未用完，請2-8°C保存。2、過期的試劑請不要用，打開后的試劑2-8°C保存。3、酶標包被板必須2-8°C保存，如有未用完的酶標包被板，打開的鋁箔袋須密封并2-8°C保存。4、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用。發(fā)布時間：2023-08-02 14:24 點擊次數(shù)：391 次
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引物純度和穩(wěn)定性分析 引物純度和穩(wěn)定性分析如下： 定制引物的標準純度對于大多數(shù)PCR應用是足夠的。因脫鹽而除去的苯甲?；彤惗□；苌?，因此不會干擾PCR。部分應用需要純化，以除去在合成過程中的任何非全長序列。這些截斷序列的產(chǎn)生是因為DNA合成化學的效率不是100％。這是個循環(huán)過程，在每個堿基加入時使用重復化學反應，使DNA從3'到5'合成。在任何一個循環(huán)都可能失敗。較長的引物，尤其是大于50個堿基，截斷序列的比例很大發(fā)布時間：2023-07-27 12:00 點擊次數(shù)：182 次
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實時熒光定量PCR原理簡述 實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料?，F(xiàn)將其原理簡述如下：1.TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可發(fā)布時間：2023-07-20 13:03 點擊次數(shù)：128 次
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熒光核酸試劑樣品處理方法 aqMan探針是一種寡核苷酸探針，它的熒光與目的序列的擴增相關(guān)。它與目標序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團連接在探針的5’末端，而淬滅劑則在3’末端。當完整的探針與目標序列配對時，熒光基團發(fā)射的熒光因與3’端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進行延伸反應時，聚合酶的5’外切酶活性將探針進行酶切，使得熒光基團與淬滅劑分離。隨著擴增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來的熒光基團不斷積累。因此熒光強度與擴增產(chǎn)發(fā)布時間：2023-07-13 14:53 點擊次數(shù)：167 次
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人T細胞受體（TCR）ELISA試劑盒實驗前準備事項小結(jié) 人T細胞受體（TCR）ELISA試劑盒實驗前準備事項小結(jié)：做好準備工作正式開始時就可以降低問題的產(chǎn)生，避免出現(xiàn)手忙腳亂的情況，總結(jié)進行ELISA試劑盒實驗前需要做那些準備工作如下：一、各種實驗儀器及材料，如微量移液器，吸頭，醫(yī)用蒸餾水等。二、提醒您應將盒內(nèi)各試劑取出，室溫放置至少30分鐘。三、應用樣品稀釋液來稀釋樣品，按照1：100的體積比來稀釋樣品如10μl的樣品加入到1ml的應用樣品稀釋液中，發(fā)布時間：2023-07-03 16:18 點擊次數(shù)：164 次
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果膠酶測試盒測定步驟 果膠酶測試盒測定步驟：1.加樣1).除包被外都需45度加樣2).加樣體積要準確3).管底加樣，不能加在管壁上4).加樣時不能產(chǎn)生氣泡2.溫浴1).加標本后和加結(jié)合物后，應立即放入按規(guī)定的反應溫度的水浴箱。2).各ELISA板不應疊在一起。3).為避免蒸發(fā)，板上應加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕紗布的金屬濕盒中。4).加入底物后，反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在發(fā)布時間：2023-06-26 15:56 點擊次數(shù)：195 次
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ELISA實驗各項條件設(shè)置優(yōu)化 在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:1、固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。2、包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在發(fā)布時間：2023-06-12 14:51 點擊次數(shù)：341 次
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人結(jié)腸組織細胞操作要點小結(jié) 人結(jié)腸組織細胞操作要點：1、將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。2、將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝發(fā)布時間：2023-05-30 10:23 點擊次數(shù)：284 次
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qPCR 實驗Ct 值偏大或普通 PCR 產(chǎn)量低分析 逆轉(zhuǎn)錄后的qPCR實驗Ct值偏大或者普通PCR產(chǎn)量低。1、RNA 模板質(zhì)量差，需要重新制備RNA 模板，可通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)量。2、 逆轉(zhuǎn)錄后的 cDNA 中含有高濃度的模板RNA 和逆轉(zhuǎn)錄試劑成分，可能會對后續(xù)的PCR 產(chǎn)生抑制作用，所以可以適當梯度提高cDNA 稀釋比例（通常來說可將cDNA原液稀釋5-10倍，其zui佳模板加入量以擴增得到的Ct值在20-30個循環(huán)為好）。3、 起始的R發(fā)布時間：2023-05-25 11:36 點擊次數(shù)：716 次