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第2年
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生化試劑的技術(shù)分類陳述 生化試劑的技術(shù)分類:1.生化分離與分析技術(shù)光譜技術(shù)已從單一的比色法發(fā)展為采用分光光度法、透射比濁法、原子吸收和火焰發(fā)射光譜法、分子熒光光譜法。分離技術(shù)除了一般的離心和超離心技術(shù)外，還有層析技術(shù)和電泳技術(shù)。層析技術(shù)包括薄層層析、凝膠層析、離心交換層析、親和層析、氣相層析、高效液相色譜（HPLC）等等。電泳技術(shù)中紙電泳、醋酸纖維膜電泳的應(yīng)用已明顯減少，瓊脂糖電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAG）應(yīng)用增多，發(fā)布時(shí)間：2024-09-14 15:18 點(diǎn)擊次數(shù)：107 次
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ELISA試劑盒主要操作步驟技巧 ELISA試劑盒主要操作步驟技巧：1加樣：①實(shí)驗(yàn)樣本過多時(shí)，可分批次操作，以減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間延長(zhǎng)造成的誤差；②加酶試劑后，用吸水紙吸干孔外試劑；③作定量試驗(yàn)時(shí)，使用加樣器加注試劑，并經(jīng)常校正其準(zhǔn)確性，此外，要做到一份樣本一個(gè)移液頭，防止交叉污染。2.溫育：①如有兩種溫度，盡量使用較低的溫育溫度、較長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間的條件；②用1個(gè)小溫度計(jì)放置在板孔反應(yīng)液中測(cè)量觀察；③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學(xué)梯度發(fā)布時(shí)間：2024-09-09 10:03 點(diǎn)擊次數(shù)：120 次
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小鼠血管舒緩激肽（BK）ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)包被和封閉的原理 ELISA包被和封閉的原理：實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要將抗原或捕獲抗體包被于固相載體上，通過檢測(cè)分子（酶或熒光基團(tuán)），將化學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，以O(shè)D值或發(fā)光值的結(jié)果，對(duì)靶蛋白進(jìn)行定量分析。ELISA中的固相載體物很多，常用的是聚苯乙烯，具有較強(qiáng)的蛋白質(zhì)吸附性。具有可制成各種形式，且不參與化學(xué)反應(yīng)的特點(diǎn)。與聚苯乙烯類似的塑料為聚氯乙烯，它質(zhì)軟板薄，可切割，價(jià)廉、但光潔度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性能比發(fā)布時(shí)間：2024-09-03 11:02 點(diǎn)擊次數(shù)：123 次
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大腸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒PCR引物二聚體減除方法 大腸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒PCR引物二聚體減除方法：如果出現(xiàn)了引物二聚體，有許多方法可以減少或消除反應(yīng)中的引物二聚體。1、首先是優(yōu)化熱循環(huán)條件，這主要是提高退火溫度。大多數(shù)情況下，兩步循環(huán)(由95°C變性步驟直接進(jìn)入60°C退火和延伸步驟)有利于強(qiáng)效擴(kuò)增，因此引物設(shè)計(jì)時(shí)設(shè)定的成功退火溫度為60°C。2、可降低引物濃度，甚至采用不同的正向引物和反向引物的比值也有一定的幫助。大多數(shù)情況下，每條引物的理想發(fā)布時(shí)間：2024-08-27 10:24 點(diǎn)擊次數(shù)：119 次
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鑒定ELISA試劑盒方法分析 鑒定ELISA試劑盒方法：鑒別方法：Ⅰ：利用干擾實(shí)驗(yàn)即可辨別elisa試劑盒是否檢測(cè)目的抗原，方法如下：（1）將針對(duì)試劑盒特異性的重組蛋白抗原和試劑盒中的檢測(cè)抗體配置成antibody:antigen≈1:2的混合孵育液（2）37℃孵育15分鐘后，代替原試劑盒中的檢測(cè)抗體（3）后續(xù)操作按照試劑盒說明書進(jìn)行，加檢測(cè)抗體、酶復(fù)合物和底物（4）實(shí)驗(yàn)完畢后，檢測(cè)其標(biāo)準(zhǔn)曲線，如果標(biāo)準(zhǔn)曲線良好則說明加入的目的發(fā)布時(shí)間：2024-08-19 14:07 點(diǎn)擊次數(shù)：123 次
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PCR反應(yīng)條件的選擇技巧 PCR反應(yīng)條件的選擇技巧主要體現(xiàn)在溫度、時(shí)間和循環(huán)次數(shù)上，溫度過高，延伸時(shí)間不夠都會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有很大的影響。PCR反應(yīng)條件三要素為溫度、時(shí)間和循環(huán)次數(shù)。溫度與時(shí)間的設(shè)置基于PCR原理三步驟而設(shè)置變性-退火-延伸三個(gè)溫度點(diǎn)。在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)中采用三溫度點(diǎn)法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40～60℃，引物退火并結(jié)合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在TaqDNA 聚合酶的作用下，使引發(fā)布時(shí)間：2024-08-16 13:43 點(diǎn)擊次數(shù)：118 次
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ELISA檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)加樣流程 ELISA檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)加樣流程：1、標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。2、加樣后及時(shí)放入孵箱。 3、加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。4、如果采用發(fā)布時(shí)間：2024-08-13 10:38 點(diǎn)擊次數(shù)：142 次
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細(xì)胞復(fù)蘇過程 細(xì)胞復(fù)蘇是指將凍存在液氮里邊或者-80℃冰箱中的細(xì)胞解凍，再培養(yǎng)傳代。細(xì)胞復(fù)蘇應(yīng)采用快速融化的方法，這樣的目的是為了讓細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)融化，從而避免慢悠悠的融化，使得水分滲入細(xì)胞內(nèi)再結(jié)晶，從而對(duì)細(xì)胞再次造成傷害，從而影響細(xì)胞的存活率。細(xì)胞復(fù)蘇：1：細(xì)胞是凍在-80℃的環(huán)境里面的，所以拿出來后，應(yīng)該盡快去37℃水浴鍋里解凍（我一般是放在PE手套里面，然后在37攝氏度的水域上快速融化。發(fā)布時(shí)間：2024-08-06 10:12 點(diǎn)擊次數(shù)：133 次
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細(xì)胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基的方法 細(xì)胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基的方法： 1.直接適應(yīng)——細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基（SFM）中。 一些類型細(xì)胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應(yīng)無血清培養(yǎng)基。對(duì)于直接適應(yīng)，接種細(xì)胞密度應(yīng)該:2.5×105~3.5×105細(xì)胞/ml。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106~3×106細(xì)胞/ml時(shí)，傳代培養(yǎng)細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞密度在培養(yǎng)4到7天后達(dá)到2×106~4×106細(xì)胞/ml時(shí)，細(xì)胞wan全適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基發(fā)布時(shí)間：2024-07-29 16:58 點(diǎn)擊次數(shù)：116 次
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ELISA試驗(yàn)溫育的時(shí)間及溫度選擇 在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加酶結(jié)合物和顯色劑后?？乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間，這一保溫過程稱為溫育(incubation)，有人稱之為孵育。溫育的時(shí)間選擇：溫育這一步是ELISA測(cè)定中容易出現(xiàn)問題的步驟。目前國(guó)內(nèi)ELISA試劑盒的反應(yīng)溫育時(shí)間為37℃30分鐘-1小時(shí)，進(jìn)口ELISA試劑盒則通常為37℃1-2小時(shí)才能有較完全的結(jié)合，低于1小時(shí)，可能會(huì)影響測(cè)定下限。ELISA發(fā)布時(shí)間：2024-07-22 16:46 點(diǎn)擊次數(shù)：126 次
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PCR產(chǎn)物純化效率提升方法 PCR擴(kuò)增完成后需要進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，在條帶單一無其他雜帶的情況下，可以直接對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行純化。提升PCR產(chǎn)物純化效率提升方法如下：1.模板純度，有較多蛋白或其他雜質(zhì)時(shí)，會(huì)一定程度影響pcr效率；2.模板量，過高的模板量反而會(huì)降低pcr效率特異性；3.引物，引物的長(zhǎng)度xu要再效率和特異性間獲得優(yōu)化，其次要控制引物gc含量；4.聚合酶，要考慮酶的保真率和速度；5.mg離子濃度，mg離子濃度過高會(huì)降發(fā)布時(shí)間：2024-07-18 14:54 點(diǎn)擊次數(shù)：118 次
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細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)基本操作步驟 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)基本操作步驟：1、進(jìn)無菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。2、操作者動(dòng)作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進(jìn)行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長(zhǎng)時(shí)間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會(huì)產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時(shí)會(huì)將其帶到培養(yǎng)液中；發(fā)布時(shí)間：2024-07-09 14:19 點(diǎn)擊次數(shù)：110 次
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堿性磷酸酶(AKP/ALP)試劑盒操作步驟 堿性磷酸酶(AKP/ALP)試劑盒操作步驟:1.樣品的準(zhǔn)備：a.細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4℃或冰浴預(yù)冷的PBS或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4℃或冰浴勻漿(可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器)。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。發(fā)布時(shí)間：2024-07-02 10:17 點(diǎn)擊次數(shù)：254 次
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標(biāo)準(zhǔn)品的穩(wěn)定性與保存 為保證檢測(cè)的連續(xù)可比性，每批標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)有相當(dāng)大的量，以保證能在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)使用。因此，每批標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)在適當(dāng)?shù)臈l件下保存，使其**活性和濃度保持穩(wěn)定。1、影響標(biāo)準(zhǔn)品穩(wěn)定的因素（1）基質(zhì)中的酶、**污染、pH的變化、氧化、潮濕等因素都可以導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)品的變性，而且這些變化可因高溫和光照加速。（2）在保存過程中發(fā)生聚合反應(yīng)等分子結(jié)構(gòu)的變化，可使標(biāo)準(zhǔn)品失活。（3）容器內(nèi)壁的吸附作用和溶劑的蒸發(fā)可造成標(biāo)準(zhǔn)品濃發(fā)布時(shí)間：2024-06-25 11:08 點(diǎn)擊次數(shù)：105 次
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RM細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)勢(shì)特點(diǎn) 細(xì)胞培養(yǎng)是指將細(xì)胞從動(dòng)物或植物體內(nèi)取出，然后在適宜的人工環(huán)境中生長(zhǎng)的過程。細(xì)胞可以在培養(yǎng)前直接從組織中取出并通過酶或機(jī)械方法進(jìn)行解離，也可以來源于已建立的細(xì)胞系或細(xì)胞株。RM細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)有以下幾點(diǎn)：1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。2.研究條件可以人為控制pH、溫度、發(fā)布時(shí)間：2024-06-18 14:43 點(diǎn)擊次數(shù)：110 次