HK-2細胞
人腎皮質近曲小管上皮細胞
貨號：HK-2
規(guī)格： 1*10 6
HK-2細胞細胞介紹
該細胞屬源于正常腎的近曲小管細胞，通過導入HPV-16 E6/E7基因而獲得永生化。將含有HPV-16 E6/E7基因的重組的逆轉錄病毒載體pLXSN 16 E6/E7轉染外生包裝細胞Psi-2，Psi-2細胞產生的病毒再去感染兼嗜性包裝細胞系PA317，*后將PA317產生的病毒顆粒導入正常的腎皮質近曲小管細胞。盡管pLXSN 16 E6/E7中含有新霉素抗性，但未用G418篩選轉導克隆。Southern和FISH分析顯示HK-2細胞來源于單克隆。PCR檢測證實HK-2細胞基因組中含有E6/E7基因。
HK-2細胞細胞特性
1）來源：正常腎
2）形態(tài)：上皮細胞樣
3）含量：>1x106 個/mL
4）污染：支原體、**、酵母和**檢測為陰性
5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存：使用含有上等胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉移至10cm培養(yǎng)皿或者T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
細胞用途：僅供科研使用。
細胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備K-SFM培養(yǎng)基(GIBCO，貨號10785-012)，添加0.05 mg/ml BPE，5 ng/ml EGF。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．HK-2細胞細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。**天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。
下面T25瓶為例；
1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2．1000RPM離心4分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至*終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
HK-2細胞注意事項：
1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物**臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要**后方能丟棄。
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