MEF ；小鼠胚胎成纖維細胞詳細說明
細胞名稱 MEF ；小鼠胚胎成纖維細胞
生長特性 貼壁生長
形態(tài)特性 成纖維樣
產(chǎn)品規(guī)格 1×10^6 cells/瓶
培養(yǎng)條件 DMEM-H+10%FBS+1%P/S
生長條件 氣相：5%CO2 95% 空氣 溫度：37 ℃
凍存條件 90%FBS+10%DMSO
MEF ；小鼠胚胎成纖維細胞常規(guī)說明：
凍存液成分：10%DMSO+40%FBS+50%基礎(chǔ)培養(yǎng)液
細胞質(zhì)檢情況：不含**、**、支原體等微生物污染
傳代建議：1:2~1:3傳代，2~3天換液1次
特別提醒：簽收細胞后，如細胞狀態(tài)不佳，或培養(yǎng)中遇到問題，煩請當(dāng)天盡快聯(lián)系，以便處理。當(dāng)天及時反饋細胞情況和細胞照片是售后跟蹤處理重要的參考依據(jù)，請務(wù)必重視。
一、 MEF ；小鼠胚胎成纖維細胞復(fù)蘇
1. 把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動。液體都融化后（大概1-1.5分鐘），拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。
2. 把上述細胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中（用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細胞都洗下來），1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
3. 把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動，使培養(yǎng)皿中的細胞均勻分布。
4. 標好細胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等，放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細胞貼壁后換培養(yǎng)基。
5. 3天換一次培養(yǎng)基。
二、 MEF ；小鼠胚胎成纖維細胞傳代
1. 培養(yǎng)皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。
2. 把原有培養(yǎng)基吸掉。
3. 加適當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌福芨采w細胞就行），消化1-2分鐘。
4. 細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。
5. 用移液槍吹打細胞，把細胞都懸浮起來。
6. 把細胞吸到15ml的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
7. 倒掉上清液，加1-2ml培養(yǎng)基，把細胞都吹起來。
8. 根據(jù)細胞種類把細胞傳到幾個培養(yǎng)皿中。一般，癌細胞分5個，正常細胞傳3個。繼續(xù)培養(yǎng)。
三、 MEF ；小鼠胚胎成纖維細胞凍存
把細胞消化下來并離心（同上）。用配好的凍存液把細胞懸浮起來，分裝到**的凍存管中，靜止幾分鐘，寫明細胞種類，凍存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃過夜，然后放到液氮灌中保存。
凍存液的配制： 70%的完全培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。
要注意的就是無菌操作！
細胞培養(yǎng)常見問題及解決方法
|
問題
|
原因
|
解決方案
|
|
細胞生長緩慢
|
生長培養(yǎng)基使用不當(dāng)
|
按照生產(chǎn)商的建議，使用相應(yīng)的預(yù)熱生長培養(yǎng)基。
|
|
生長培養(yǎng)基中血清質(zhì)量差
|
使用其他批次血清。
|
|
傳代操作不當(dāng)
|
按照生產(chǎn)商的建議消化時間及傳代比例進行操作。
|
|
換液過于頻繁
|
降低換液頻率，參考生產(chǎn)商推薦的換液頻率。
|
|
細胞傳代次數(shù)過多
|
使用傳代次數(shù)較少的健康細胞。
|
|
細胞生長超過匯合狀態(tài)
|
哺乳動物細胞傳代應(yīng)在細胞處于對數(shù)期、未達到匯合狀態(tài)時進行，建議細胞密度達 80-90%傳代。
|
|
細胞被支原體污染
|
將細胞、培養(yǎng)基和試劑丟棄；新取一只凍存細胞，并且使用新的培養(yǎng)基和試劑。
|
|
細胞復(fù)蘇存活率低
|
細胞凍存不當(dāng)
|
新取一只凍存細胞，并儲存在液氮中。將細胞儲存在液氮中，直至復(fù)蘇。
|
|
自行制備的凍存細胞無活性
|
將細胞按照生產(chǎn)商推薦的密度凍存。
|
|
制備凍存細胞時使用傳代次數(shù)少的細胞。
|
|
嚴格按照生產(chǎn)商推薦的操作程序凍存細胞。請注意本手冊推薦的冷凍程序是凍存細胞的一般流程，只能作為指導(dǎo)原則使用。
|
|
新取一只凍存細胞。
|
|
細胞復(fù)蘇方法不當(dāng)
|
嚴格按照生產(chǎn)商推薦的操作程序復(fù)蘇細胞。請注意本手冊推薦的解凍程序是復(fù)蘇細胞的一般流程，只能作為指導(dǎo)原則使用。
|
|
確保冷凍細胞解凍迅速，接種前用預(yù)熱的生長培養(yǎng)基緩慢稀釋細胞。
|
|
復(fù)蘇培養(yǎng)基使用不當(dāng)
|
使用生產(chǎn)商推薦的培養(yǎng)基。確保培養(yǎng)基使用前已經(jīng)預(yù)熱。
|
|
細胞稀釋過度
|
按照生產(chǎn)商的建議，將解凍后的細胞高密度接種，以改善復(fù)蘇效果。
|
|
處理細胞時動作不夠輕柔
|
凍存和復(fù)蘇過程對大多數(shù)細胞都會造成不利影
響。不要通過渦旋振蕩或者用力敲打培養(yǎng)瓶的方法使細胞脫落(培養(yǎng)昆蟲細胞時除外)，也不要高速離心細胞。
|
|
凍存液中所用保護劑在儲存過程中未避光
|
如果未避光儲存，凍存保護劑會轉(zhuǎn)變?yōu)閷毎卸拘缘奈镔|(zhì)；新取一只凍存保護劑，重新凍存細胞。
|
- 溫馨提示：為規(guī)避購買風(fēng)險，建議您在購買前務(wù)必確認供應(yīng)商資質(zhì)與產(chǎn)品質(zhì)量。
- 免責(zé)申明：以上內(nèi)容為注冊會員自行發(fā)布，若信息的真實性、合法性存在爭議，平臺將會監(jiān)督協(xié)助處理，歡迎舉報